目的： 优化小鼠脑内星形胶质细胞的体外培养方法，为星形胶质细胞的功能研究奠定实验基础。 方法： 取新生0～1 d的C57BL/6乳鼠大脑皮质，胰酶消化结合机械吹打方法，分离皮质细胞，制成细胞悬液并差速贴壁处理，待细胞接种24 h轻柔换液，以后每隔2～3 d换液，且每次换液前手动振荡洗涤2次，传代3次后，行胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫细胞化学染色及免疫荧光染色鉴定。 结果： 经过原代及传代培养，获得形态典型、纯度在95%以上的星形胶质细胞。结论： 优化后的体外培养星形胶质细胞方法，稳定有效，操作简便易行，并可获得高纯度的星形胶质细胞。

目的:  探讨镇江地区感染人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的女性子宫颈病变情况及HPV基因型别分布特点。方法: 选择在19种HPV基因型感染筛查中HPV结果阳性的女性978名，进行阴道镜检查并活检，以病理结果作为诊断宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）的金标准。结果：  978名女性中无CIN病变、CINⅠ、CINⅡⅢ和宫颈癌的检出率分别为89.26%（873/978）、5.42%（53/978）、4.91%（48/978）和0.41%（4/978），CINⅠ、CINⅡⅢ和宫颈癌组的HPV基因型别分布有差异，随宫颈病变程度增高， 16和18型的HPV检出比例增加，宫颈高度病变患病高峰为36～40岁年龄段。978名妇女检出19种基因型HPV共1 240频次，其中高危型931例（75.08%），以HPV52、58、16、51、18和39型多见,低危型97例（7.82%），以HPV43型多见，中国人常见亚型共212例（17.10%），以HPV53、CP8304型多见；HPV单一型别感染为80.16%(784/978），多重型别混合感染为19.84%（194/978），多重感染率随年龄增长呈下降趋势。不同等级宫颈病变间的HPV多重感染率差异无统计学意义(P＞0.05)。结论： 镇江地区生殖道有HPV感染的女性子宫颈病变多处于发病早期，子宫颈病变严重程度与HPV多重感染无关，而与不同基因型HPV感染有关，HPV16/18型与宫颈病变进展关系密切。  

目的： 探索快速建立肺癌耐药细胞模型的新方法，并探讨肺癌耐药和干细胞的相关性。方法： 应用无血清培养联合药物筛选法建立肺腺癌细胞耐药株A549/ADM；MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡、ABCB1和ABCG2的表达水平及细胞内多柔比星的浓度；细胞免疫荧光及流式细胞仪通过特异性表面抗原标记法（CD133）检测肿瘤干细胞含量。裸鼠皮下种植瘤试验评估A549/ADM的致瘤性。结果： A549细胞经无血清培养可见细胞球形成；A549/ADM细胞对多柔比星、长春新碱、紫杉醇均产生了耐药，其耐药指数分别为A549的13.167，12.86，3.4倍；与亲代A549相比， 耐药株A549/ADM S期细胞比例由(45.76±1.41)% 降低至(23.33±1.32)%,细胞凋亡百分率由(58.23±0.82)% 减少至(16.49±0.77)%；耐药株A549/ADM中ABCB1和ABCG2的表达水平明显增高(P<0.05)，且细胞内多柔比星浓度明显低于A549细胞； CD133细胞在A549/ADM和A549中的比例分别为(6.2±0.7)％和(1.9±0.2)％(P<0.05)，免疫荧光检测A549/ADM细胞CD133表达水平较A549细胞高；A549/ADM具有高致瘤性。结论： 无血清培养联合多柔比星诱导能高效富集肺癌干细胞，成功建立了人肺腺癌A549/ADM多药耐药细胞模型。

目的: 探讨体外培养的人肝细胞系在重组人转化生长因子β1（TGF-β1）诱导下是否发生上皮-间质转化（epithelial-mesenchyme transition， EMT）以及相关标志物的表达变化。方法: 人类肝细胞HL7702在含20%小牛血清的1640培养液培养2 d，改用无血清培养并TGF-β1分别诱导24 h，48 h，72 h;观察诱导前后细胞的形态学变化，实时荧光定量RT-PCR及蛋白质免疫印迹技术分析细胞中EMT相关基因和蛋白表达情况。 结果: 显微镜下观察到TGF-β1诱导前，肝细胞是不规则的六边形，诱导后细胞形态拉长变成纺锤形，细胞间隙变大;实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹显示上皮化标志物E-钙黏附蛋白在TGF-β1诱导后的细胞中表达显著下降，而间质化标志物N-钙黏附蛋白、波形蛋白和Twist却显著增加。 结论: 正常人类肝细胞株HL7702经重组人TGF-β1的诱导发生上皮间质转化，这为深入研究TGF-β1和肝纤维化之间的关系奠定了基础。

目的： 研究细胞因子信号抑制蛋白3（suppressors of cytokine signaling3，SOCS3）基因3′端非翻译区（3′untranslated region，3′UTR）微小RNA（microRNA，miRNA）的调控作用，构建重组SOCS3基因3′UTR荧光素酶报告载体，并通过荧光素酶活性测定，初步分析可能调控SOCS3基因表达的miRNAs。方法： 采用PCR方法从原代培养的小鼠星形胶质细胞基因组DNA中扩增SOCS3基因3′UTR序列，插入荧光素酶报告载体pGL3Promoter，获得重组载体pGL3Promoter/SOCS3；通过Target Scan5.2、RNAhybrid 和FINDTAR3软件预测可能与SOCS3基因3′UTR结合的miRNAs；将pGL3Promoter/SOCS3重组质粒和miRNAs共转染HEK 293T细胞，测定SOCS3 3′UTR荧光素酶的活性。结果： 酶切及核酸测序证实，成功构建了SOCS3基因3′UTR序列的荧光素酶报告重组子；miRNA靶位点预测显示，SOCS3基因可能是miR203、miR291a5p、miR9、miR140和miR130b的作用靶标；与对照组相比，miR203、miR291a5p、miR140能使SOCS3 3′UTR荧光素酶的活性显著降低。结论：  成功构建了SOCS3 基因3′UTR荧光素酶报告载体，且miR203、miR291a5p、miR140可显著降低其荧光素酶的活性。

目的：  探讨人脐带间质干细胞( human umbilical cord mesenchymal stem cells，hucMSCs)用CMDil染料标记之后生物学特性及体内定位示踪情况。方法： 采用脐带组织块贴壁培养法分离人脐带间质干细胞，用CMDil染料标记第3代hucMSCs；采用细胞计数法分析CMDil标记后hucMSCs的生长变化情况；通过活体成像仪观察CMDil染料标记的hucMSCs移植于急性肾损伤大鼠后的体内定位。结果： CMDil染料标记hucMSCs的效率很高；标记后的hucMSCs生长增殖能力没有发生明显变化；体内示踪可以观察到标记的hucMSCs。结论： CMDil标记不影响hucMSCs的生长增殖特征，并且能够在体内示踪，为后续研究提供了实验基础。

目的： 建立一种简便易行的小鼠胰腺星状细胞（pancreatic stellate cells，PSCs）分离培养方法,并观察分离培养结果。方法： 在原有大鼠胰腺星状细胞分离培养技术基础上，将胰腺组织块碎片进行分离培养并传代，从而得到纯化的星状细胞。采用油红O染色,结合免疫荧光以及蛋白质印迹法鉴定小鼠胰腺星状细胞，通过细胞计数及台盼蓝染色观察细胞生长及活力。结果：组织块法所得小鼠原代胰腺星状细胞油红染色阳性;第3天起细胞快速生长并逐渐活化，传代后的细胞基本活化。活化的PSCs免疫荧光染色显示α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达阳性。蛋白质印迹结果表明，活化的PSCs均表达α-SMA、结蛋白，完全活化后结蛋白表达明显增多（P<0.05）。结论： 通过组织块法可成功分离出小鼠胰腺星状细胞,其细胞产率、活力和纯度均可满足体外研究需要。

目的： 比较经皮肾镜取石术（percutaneous nephrolithotomy,PCNL）和后腹腔镜下输尿管切开取石术（retroperitoneal laparoscopic ureterolithotomy ,RLU）治疗复杂性输尿管上段结石的疗效。方法： 回顾性分析71例复杂性输尿管上段结石患者临床资料，PCNL组31例和RLU组40例，对比两组病例手术时间、术后1周结石清除率、手术并发症。结果： 71例手术全部成功，手术时间PCNL组[（48.52±17.51 ）min]短于RLU组[（87.43±22.63）min]，差异有统计学意义(P<0.01)。术后1周结石清除率PCNL组为96.8%（30/31），RLU组100%（40/40），两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。术中、术后均无明显出血及周围脏器损伤等并发症。术后随访3~10个月，平均7个月，两组均未发现结石复发及输尿管狭窄。结论： PCNL和RLU治疗复杂性输尿管上段结石均是安全、有效的方法。复杂性输尿管上段结石的治疗可视患者具体情况、单位设备条件、术者经验酌情选择PCNL或RLU。

目的: 建立肠炎相关性结直肠癌的小鼠模型。方法: 给予小鼠单次小剂量腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane, AOM)联合2%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulpate, DSS)自由饮用，建立肠炎相关性结直肠癌小鼠模型。对照组小鼠给予PBS腹腔注射后普通饮水。每天观察症状，2%DSS 5 d，普通饮水16 d，此21 d为1个循环，共进行4个循环，结束后，断颈处死小鼠，取脾脏、肠系膜淋巴结、结肠，观察并比较两组小鼠脾脏，肠系膜淋巴结大体改变和结肠HE染色情况。结果： 与对照组比较，实验组小鼠脾脏、肠系膜淋巴结明显增大，结肠远端出现肿瘤。HE染色结果显示，实验组发病小鼠结肠黏膜层及黏膜下层出现广泛的炎症细胞浸润，腺体组织结构紊乱、破坏，出现腺管样结构，具有组织异型性。结论： 单剂量AOM与DSS联合使用可在短期内诱导小鼠结肠肿瘤的发生。