目的： 利用网络药理学和分子对接技术分析“茵陈-玉竹”药对治疗糖尿病肾病的机制。方法： 通过中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)、中医药百科全书(ETCM)、中医药分子机制生物信息学注释数据库(BATMAN-TCM)检索“茵陈-玉竹”药对的主要化学成分，通过药物靶点数据库(TTD)、人类在线孟德尔遗传(OMIM)数据库、DisGeNET、GeneCards等数据库收集糖尿病肾病的疾病靶点，进而筛选茵陈、玉竹与糖尿病肾病的交集核心靶点。利用Cytoscape 3.7.2软件构建“化合物-靶点-疾病网络”，同时基于DAVID数据库对靶点进行GO功能富集和KEGG通路富集分析。结果： 获取“茵陈-玉竹”药对主要活性成分31个，作用靶点351个，糖尿病肾病相关基因2 911个，交集基因185个，其中起关键作用的活性成分为槲皮素、滨蒿内酯、莨菪亭、D-香芹酮和异鼠李素；构建可视化PPI网络得到185个节点，851条边，平均度值9.2，获得前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)、核因子κB1(NFKB1)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、MAPK3、MAPK14等“茵陈-玉竹”药对治疗糖尿病肾病的关键靶点。GO富集分析获得1 181条相关通路，KEGG通路富集获得180条信号通路。结论： “茵陈-玉竹”药对可能通过调控磷脂酰肌醇3激酶苏氨酸蛋白激酶(PI3K-Akt)、MAPK、糖基化终末产物糖基化终产物受体(AGE-RAGE)等信号通路，抑制各种炎症反应与氧化应激，调节异常代谢，从而对糖尿病肾病产生治疗作用。

       外泌体是含有来源细胞内容物的细胞外小囊泡，通过传递蛋白、核酸及脂类等生物活性分子介导细胞间通讯。肿瘤来源的外泌体与肿瘤的耐药性密切相关，环状RNA（circular RNA,circRNA）是一种环形稳定的内源性非编码RNA。近年来，关于外泌体转移circRNA在多种肿瘤耐药发展中的作用研究取得进展。因此，本文总结了外泌体circRNA参与肿瘤发病和耐药机制的研究内容。

 目的： 探讨草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征。方法： 应用乙二醇氯化铵诱导法构建草酸钙肾结石大鼠模型，通过Von Kossa′s组织染色验证模型构建成功。单细胞测序方法鉴定髓袢细胞，对比分析草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征，应用生物信息学方法进行差异表达基因的GO、KEGG以及GSEA富集分析。结果： 相较于对照组，实验组大鼠肾脏组织中发现钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色，表明草酸钙肾结石大鼠模型构建成功。单细胞测序分析发现，在实验组髓袢细胞亚群共有差异表达基因3 510个，其中880个表达上调，2 630个表达下调；其中LOC499584，白介素7（interleukin 7,Il7），双特异性磷酸酶1（dual specificity phosphatase 1,Dusp1）以及基质Gla蛋白（matrix Gla protein，Mgp）表达上调最为显著；HORMA结构域蛋白质2（HORMA domain containing 2，Hormad2），LOC361914，JUN二聚体蛋白2（Jun dimerization protein 2，Jdp2）以及生长抑素-B和血小板反应蛋白1型结构域蛋白（somatomedin-B and thrombospondin type-1 domain-containing protein，Sbspon）表达下调最为显著。KEGG分析发现实验组髓袢细胞亚群氧化磷酸化、代谢途径、丙酸代谢、自噬、溶酶体以及胞吞作用等信号通路发生显著改变。结论： 本研究首次揭示了草酸钙肾结石大鼠模型肾脏组织髓袢细胞亚群基因表达谱特征，为肾结石的形成及其介导的肾损伤研究提供了一定的参考依据。

 目的： 探讨异质核核糖核蛋白A2B1(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2B1，hnRNPA2B1)对胰腺癌细胞铁死亡的影响及其潜在机制。方法： 将3种胰腺癌PaTu8988、MIA-paca2、PANC1细胞用不同浓度Erastin处理3 d，CCK8法检测细胞活性，计算3种细胞Erastin半数抑制浓度(IC50)并比较其对Erastin的抵抗力；荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法分别检测3种胰腺癌细胞中hnRNPA2B1 mRNA和蛋白的相对表达。通过GEPIA平台分析hnRNPA2B1在胰腺癌组织和正常组织中的差异性表达，通过GEO数据库下载临床数据集分析差异性表达hnRNPA2B1患者的预后。在PaTu8988细胞中干扰hnRNPA2B1表达，分别转染sh-Control、sh-hnRNPA2B1质粒；在PANC1细胞中过表达hnRNPA2B1，分别转染Vector、Flag-hnRNPA2B1质粒；分别采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹检测转染效率，通过Transwell实验检测hnRNPA2B1对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响，通过CCK8法检测hnRNPA2B1对胰腺癌细胞增殖的影响；对sh-Control组和sh-hnRNPA2B1组、Vector组和Flag-hnRNPA2B1组，分别予以对照(0 μmol/L Erastin)、Erastin(IC50浓度)处理，通过流式细胞术检测脂质过氧化物含量，比色法检测丙二醛和组织铁含量，此外shhnRNPA2B1组和Flag-hnRNPA2B1组加入Erastin的同时加入铁死亡挽救剂Ferrostatin-1，坏死挽救剂Necrostatin-1或凋亡挽救剂ZVAD-FMK，台酚蓝染色法检测细胞活性；qRT-PCR和蛋白免疫印迹法分别检测胰腺癌细胞转铁蛋白受体(transferrin receptor，TFRC)、铁蛋白重链、谷胱甘肽过氧化物酶4、溶质载体家族7成员11等mRNA和蛋白相对表达水平。结果： 3种胰腺癌细胞对Erastin抗性由高到低依次是PaTu8988、MIA-paca2、PANC1细胞，其Erastin IC50依次为18.020、15.760、2.947 μmol/L；hnRNPA2B1表达量由高到低的趋势与Erastin IC50趋势相同，于PaTu8988细胞中最高，MIA-paca2细胞中次之，PANC1细胞中最低(P均<0.05)；胰腺癌组织中hnRNPA2B1表达水平明显高于正常组织，高表达hnRNPA2B1患者预后较差(P均<0.05)。下调hnRNPA2B1表达后，PaTu8988细胞迁移、侵袭和增殖能力明显降低，上调则与之相反(P均<0.05)。经Erastin处理后shhnRNPA2B1组和Flag-hnRNPA2B1组降低的细胞活性仅可被Ferrostatin-1挽救(P<0.05)；与sh-Control组相比，sh-hnRNPA2B1组脂质过氧化物、丙二醛和组织铁含量明显增高(P均<0.05)；与Vector组相比，Flag-hnRNPA2B1组脂质过氧化物、丙二醛和组织铁含量明显降低(P均<0.05)。hnRNPA2B1可抑制TFRC表达，干扰hnRNPA2B1则与之相反(P均<0.05)。结论： hnRNPA2B1通过抑制TFRC表达阻止铁蓄积，从而促进胰腺癌细胞铁死亡抵抗。

目的： 研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯［di-(2-ethylhexyl) phthalate,DEHP］对斑马鱼胚胎发育的影响及潜在的分子机制。方法： 将斑马鱼胚胎随机分为5组，分别为空白对照组、二甲基亚砜组以及8、40、200 μg/L DEHP组，暴露至96 hpf，记录死亡率、孵化率、畸形率、心率、体长和胚胎自主运动次数等发育指标；采用酶学分析检测仔鱼体内超氧化物歧化酶(SOD)活力、谷胱甘肽过氧化氢酶(GPx)活力及丙二醛含量；采用实时荧光定量PCR法测定细胞凋亡、葡萄糖转运以及蛋白质、脂肪酸和糖原合成相关mRNA表达。结果： (1) 与对照组相比，8 μg/L DEHP组斑马鱼胚胎/仔鱼死亡率显著增加(P＜0.01)，仔鱼体长显著降低(P＜0.05)；40、200 μg/L DEHP组斑马鱼胚胎/仔鱼死亡率和畸形率显著增加(P＜0.01)，孵化率、心率、体长以及胚胎自主运动次数明显降低(P＜0.05或P＜0.01)。(2) 与对照组相比，8 μg/L DEHP组斑马鱼仔鱼体内GPx活力显著降低(P＜005)；40、200 μg/L DEHP组斑马鱼仔鱼体内SOD、GPx活力明显降低且丙二醛含量显著增加(P＜0.01)。(3) 与对照组相比，8 μg/L DEHP组葡萄糖转运信号通路中Pi3k mRNA表达显著上调(P＜0.01)；40、200 μg/L DEHP组凋亡信号通路中Bax/Bcl-2、Caspase-3和Ras mRNA表达显著上调(P＜0.01)，葡萄糖转运信号通路中Akt和Pi3k mRNA表达显著上调(P＜0.01)，Erk1/2 mRNA表达显著下调(P＜0.05或P＜0.01)，蛋白质、脂肪酸和糖原合成信号通路中Mtor、Gsk-3α和Gsk-3β mRNA表达显著上调(P＜0.05或P＜0.01)。结论： DEHP可能通过诱导细胞凋亡，改变代谢相关mRNA表达，造成氧化损伤，从而影响斑马鱼胚胎的生长发育，产生发育毒性。

目的： 探究人脐带间充质干细胞来源小细胞外囊泡（hucMSCs derived small extracellular vesicles,hucMSC-sEVs）对糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）大鼠肾脏损伤的修复作用及可能机制。方法： 分离培养hucMSCs并从培养上清液中提取hucMSC-sEVs。高脂联合链脲佐菌素构建DKD大鼠模型，将大鼠随机分为对照组、DKD组和hucMSC-sEVs组，每组6只，hucMSC-sEVs组在造模8周后进行尾静脉注射hucMSC-sEVs，24周后收集肾组织。肾脏组织切片进行HE染色、过碘酸雪夫（PAS）染色和天狼星红染色，观察大鼠肾组织病理学改变和纤维化样改变；蛋白质印迹检测肾组织中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达；免疫组织化学染色、免疫荧光染色和蛋白质印迹检测大鼠肾组织血小板反应蛋白1（THBS1）及其受体CD36和CD47的表达水平。结果： 与对照组相比，DKD组大鼠肾脏发生明显的病理改变，如肾小球基底膜增厚和系膜增生，肾小管扩张伴有空泡变性，间质发生明显纤维化改变伴炎症细胞浸润，肾组织中Bax表达明显增加（P<0.05），Bcl-2表达显著下降（P<0.01），THBS1及其受体CD36和CD47的表达水平明显增加（P<0.001）；与DKD组相比，hucMSC-sEVs组大鼠肾组织病理损伤和纤维化水平明显缓解，Bax表达显著下降（P<0.01），Bcl-2表达显著增加（P<0.01），肾脏中THBS1及其受体CD36和CD47的表达水平显著降低（P<0.001）。结论： HucMSC-sEVs可明显减轻DKD肾组织损伤发挥保护作用，其机制可能与靶向抑制THBS1的表达有关。

目的： 探究CXC趋化因子配体14（CXCL14）对糖尿病动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）小鼠脂肪组织焦亡及AS斑块的影响。方法： ① 腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病ApoE^-/-小鼠，对糖尿病小鼠高脂喂养20周，构建糖尿病AS模型（模型组），对照小鼠仅高脂饮食（AS组）；② 在糖尿病小鼠后肢内侧皮下注射抗CXCL14短肽（抗CXCL14组），对照糖尿病小鼠仅皮下注射生理盐水；③ 在糖尿病小鼠后腹股沟皮下脂肪组织原位注射腺相关病毒(AAV)以抑制消化道皮肤素（GSDMD）介导的细胞焦亡，分为：AAV-shscramble组、AAV-shGSDMD组、抗CXCL14+AAV-shscramble组、抗CXCL14+AAV-shGSDMD组。各组小鼠高脂饮食饲养20周后，麻醉下收集小鼠血清，应用生化试剂盒检测小鼠血脂水平（总胆固醇、三酰甘油、LDL-C、HDL-C）。处死小鼠，取附睾脂肪组织进行电镜扫描及HE染色观察脂肪细胞变化；利用qRT-PCR技术分析附睾脂肪组织焦亡相关因子GSDMD、天冬氨酸蛋白水解酶1（Caspase-1）、NLR家族吡啶结构域蛋白3（NLRP3）炎症小体、白介素1β（IL-1β）和炎症因子白介素-6（IL-6）的变化。分离提取小鼠主动脉，通过HE染色和血管大体油红O染色观察主动脉AS斑块的相对面积。结果： 与AS组相比，模型组小鼠附睾脂肪组织中的脂肪细胞肥大并数量减少（P<0.01），主动脉AS斑块面积显著增加，总胆固醇、三酰甘油、LDL-C水平明显升高，HDL-C明显降低；附睾脂肪组织的焦亡相关因子和IL-6水平明显升高（P<0.05），表明糖尿病促进小鼠AS斑块与脂肪组织焦亡。注射抗CXCL14短肽可以减少主动脉斑块面积，改善血脂水平，并抑制脂肪组织焦亡，脂肪细胞数量增多。GSDMD敲减后，附睾脂肪组织中脂肪细胞数量增多，主动脉AS斑块面积减少；然而注射抗CXCL14免疫肽后，AAV-shGSDMD组AS斑块面积变化不显著。结论： 抗CXCL14可以减轻脂肪组织焦亡并缓解糖尿病AS的发展。

目的： 基于生物信息学探讨铁死亡（ferroptosis）参与2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）患者发生动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的枢纽基因和潜在机制。方法： 从GEO数据库中获取数据集GSE20966（T2DM）和GSE43292（AS），利用Limma R包鉴定差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs），绘制热图和火山图，交叉分析获得与2种疾病相关的DEGs；进行GO和KEGG富集分析探寻DEGs的生物功能。交联从FerrDb数据库获取的铁死亡相关基因（ferroptosisrelated genes,FRGs），利用LASSO回归和随机森林分析筛选枢纽基因，使用ROC曲线以及验证集GSE76895（T2DM）和GSE28829（AS）进行验证。最后绘制基因miRNA网络分析枢纽基因的作用机制。结果： 在T2DM和AS数据集中共鉴定出606个相关DEGs。与FRGs交联获得了20个潜在相关基因。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（cyclin-depedent kinase inhibitors 1A，CDKN1A）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶8（poly ADP-ribose polymerase 8，PARP8）、磷脂酰乙醇胺结合蛋白1（phosphatidylethanolamine binding protein 1，PEBP1）和孕酮受体膜成分1（progesterone receptor membrane component 1，PGRMC1）是铁死亡参与T2DM患者AS的枢纽基因。4个基因在数据集GSE20966和GSE43292中ROC曲线下面积（area under the curve，AUC）均大于0.7，具有诊断价值。PEBP1和PGRMC1在验证集GSE76895和GSE28829中显著下调。此外，13个miRNAs与4个枢纽基因密切相关。结论： CDKN1A、PARP8、PEBP1和PGRMC1通过铁死亡参与T2DM患者AS，有望成为新的治疗靶点。

目的： 探究去势抵抗性前列腺癌（castration-resistant prostate cancer，CRPC）的肿瘤微环境中相关信号分子，并分析其与肿瘤发生发展之间的关系。方法： 通过基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）中CRPC患者的单细胞RNA测序（scRNA-seq）数据（GSE137829），分析CRPC肿瘤微环境的主要组成成分；通过CellPhoneDB分析微环境中不同细胞间的相互作用，重点揭示肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts,CAFs）与恶性上皮细胞之间的联系；应用CellChat分析CAFs与恶性上皮细胞通讯相关的信号分子，结合肿瘤基因组图谱前列腺癌（TCGAPRAD）的数据，寻找与CRPC患者预后密切相关的信号分子。使用siRNA在CRPC细胞中敲低相关信号分子Delta样经典Notch配体3（DLL3），并通过实时荧光定量PCR、蛋白质印迹实验验证敲低效率。通过CCK8法、EdU实验以及Transwell和含有基质胶的Transwell实验，探究DLL3对CRPC细胞增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。单基因差异分析以及过表征富集分析（ORA）、基因集富集分析（GSEA）寻找DLL3相关差异表达基因富集的通路。结果： 单细胞转录组测序结果表明，CRPC肿瘤微环境的主要细胞组成包括恶性上皮细胞、CAFs以及免疫细胞等。CAFs与恶性上皮细胞之间通过通讯相关信号分子相互作用实现紧密的通讯，共筛选出CAFs与恶性上皮细胞通讯密切相关的信号分子63个；单因素Cox回归分析显示关键信号分子肿瘤坏死因子相关配体超家族成员12（TNFSF12）以及DLL3转录本的表达与CRPC患者预后显著相关，其中DLL3高表达与CRPC患者不良预后显著相关。体外实验结果表明，敲低DLL3显著抑制CRPC细胞的生长、增殖、迁移和侵袭能力。KEGG和GSEA富集分析表明，DLL3相关差异表达基因在代谢相关通路中显著富集。结论： 肿瘤微环境中CAFs与恶性上皮细胞之间通过细胞间通讯相关信号分子实现紧密通讯，其中DLL3的表达与患者预后呈负相关，且影响CRPC细胞生物学行为，DLL3或是人CRPC恶性进展的关键信号分子。