非酒精性脂肪性肝病
宗斌, 李冉, 钱元霞, 等
江苏大学学报(医学版).
2025, 35(03):
197-211.
目的: 探究柴胡提取物对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的影响及与含铜胺氧化酶3(amine oxidase copper-containing 3,AOC3)-磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路的关系。方法: 选择2022年5月至2023年5月于镇江市中西医结合医院确诊的69例NAFLD患者,另选择70例健康对照者,采用ELISA法检测血清中苯丙氨酸(Phe)和酪氨酸(Tyr)含量,分别采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测血清中AOC3 mRNA和蛋白相对表达。构建C57BL/6小鼠NAFLD模型,造模成功后分为对照组、模型组及柴胡提取物低剂量组(50 mg/kg)、中剂量组(75 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg),每组6只,柴胡提取物组每天分别给予对应柴胡提取物灌胃,对照组和模型组予以对应体积的生理盐水灌胃,4周后采用ELISA法检测血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)含量及肝组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及丙二醛水平,采用HE染色评价肝组织病理。通过转染siRNA敲低AOC3表达,筛选出最适siRNA2(50 nmol/L);将肝细胞分为对照组、模型组、siRNA2组(50 nmol/L)、柴胡组(100 μg/mL)和联合组(50 nmol/L siRNA2+柴胡100 μg/mL),采用MTT、流式细胞术及蛋白免疫印迹分别检测细胞增殖率、凋亡率以及p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果: NAFLD患者及模型小鼠血清中Phe、Tyr含量及AOC3 mRNA和蛋白相对表达水平分别显著高于健康者和对照组(P<0.01)。与模型组相比,柴胡中、高剂量组小鼠血清中Phe、Tyr、TC、TG、LDL-C、NO、TNF-α水平明显降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01),肝纤维化及活性氧沉积均显著改善(P<0.01)。与siRNA2组和柴胡组相比,联合组肝细胞增殖率明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),脂毒性代谢物(TG、TC)含量显著降低(P<0.01),氧化应激明显抑制(丙二醛含量降低,SOD/GSH-Px升高,P<0.01或P<0.05),肝功能显著改善(ALT、AST含量降低,P<0.01),PI3K/AKT信号通路活化(AOC3、p-PI3K、p-AKT表达下降,P<0.01)。结论: 柴胡提取物可能通过调节NAFLD相关氨基酸代谢,降低过氧化物含量,阻断AOC3介导的PI3K/AKT通路过度活化,降低AOC3表达以及p-PI3K、p-AKT表达,进而改善NAFLD。