基础医学
于绍华1, 郭允天1, 熊韦琪2, 叶强3, 步雪峰1
2026, 36(02): 120-128.
目的: 探讨重组稳定表达狂犬病毒糖蛋白的新城疫病毒疫苗(recombinant avirulent Newcastle disease virus LaSota strain expressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)对胃癌细胞铁自噬的影响及其潜在机制。
方法: 采用CCK-8法检测不同稀释倍数rL-RVG对胃癌HGC-27和SGC-7901细胞增殖能力的影响,并筛选出最适稀释倍数;采用蛋白免疫印迹法检测胃癌HGC-27和SGC-7901细胞中单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)、磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)和苄氯素1(Beclin-1)等AMPK/Beclin-1轴相关蛋白,以及核受体辅激活因子4(nuclear receptor coactivator 4,NCOA4)、铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH1)和微管相关蛋白1A/1B轻链3(light chain 3,LC-3)蛋白表达水平,同时采用细胞Fe2+荧光法测试盒检测细胞Fe
2+含量。采用siRNA-beclin-1、AMPK抑制剂Compound C处理胃癌HGC-27和SGC-7901细胞,采用蛋白免疫印迹法检测AMPK/Beclin-1轴蛋白表达以及细胞Fe
2+荧光法测试盒检测Fe2+荧光强度。用稀释10
3倍rL-RVG处理胃癌HGC-27和SGC-7901细胞,采用CCK-8法测定细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力。
结果: rL-RVG可显著抑制胃癌HGC-27和SGC7901细胞增殖,且随着稀释倍数减小,病毒量增多,抑制能力逐渐增强(P均<0.05);当稀释倍数为10
3倍时,与半数抑制浓度(IC
50)最为接近,故采用稀释10
3倍的rL-RVG进行后续实验。rL-RVG可引起胃癌HGC-27和SGC-7901细胞内AMPK、p-AMPK、Beclin-1、LC-3、NCOA4蛋白表达明显增加,Fe2+荧光强度明显增强,FTH1表达明显减少(P均<005);敲低Beclin-1和抑制AMPK表达致胃癌HGC-27和SGC-7901细胞AMPK、p-AMPK、Beclin-1、LC-3、NCOA4蛋白表达明显减少,Fe
2+荧光强度明显减弱,FTH1表达明显增加(P均<0.05)。稀释103倍的rL-RVG可显著抑制胃癌HGC-27和SGC-7901细胞增殖、侵袭及迁移能力,而Compound C可部分逆转rL-RVG对胃癌细胞的抑制作用(P均<0.05)。
结论: rL-RVG可通过AMPK/Beclin-1轴影响相关蛋白表达,进而促进胃癌HGC-27和SGC-7901细胞发生铁自噬。