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• 2021年, 31卷, 第04期
  刊出日期：2021-07-30

    

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  结直肠癌专题
  基础医学
  临床医学
  药学
  综述
  

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  2021年第4期目次

  编辑部

  2021, 31(04): 0.

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结直肠癌专题
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  结直肠癌专题

  microRNA-1290通过 NDRG1/NF-κB/IL-6信号通路促进结肠癌细胞迁移和侵袭

  莫辉， 徐岷

  2021, 31(04): 277-283.

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  目的:  探讨微小RNA-1290（microRNA-1290，miR-1290）通过Nmyc下游调节基因 1（N-Myc downstream-regulated gene 1，NDRG1）调控NFκB/IL6活化分子机制及其对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法: 选择48例结肠癌患者肿瘤及癌旁组织，用免疫组织化学染色检测IL6表达；qRT-PCR法检测20例肿瘤组织，结肠癌细胞与正常结肠上皮HCoEpiC细胞中IL-6 mRNA及miR-1290表达；结合miR-1290类似物及抑制剂处理，蛋白质印迹和ELISA法分别检测结肠癌细胞中p-NF-κB、NF-κB、NDRG1、上皮钙黏素、波形蛋白表达以及IL-6外泌量；小干扰RNA及中和性抗体靶向下调IL-6表达，miR-1290类似物处理，划痕实验以及Transwell实验检测结肠癌细胞迁移、侵袭能力。结果：  结肠癌中IL-6免疫组织化学染色评分明显高于癌旁组织（P<0.01）；结肠癌瘤体内miR-1290与IL-6 mRNA表达呈正相关（r=0.845 4，P<0.01）；与HCoEpiC细胞相比，结肠癌细胞中miR-1290表达明显增高（P均<0.01）；上调miR-1290表达可抑制NDRG1表达从而促进NF-κB信号通路及上皮间充质转化活化（P<0.01），而下调miR-1290表达可促进NDRG1、上皮钙黏素表达并抑制p-NF-κB和波形蛋白形成（P<0.01）；划痕实验显示上调miR-1290表达可增强结肠癌细胞迁移能力，而敲低IL-6后细胞愈合率则明显抑制（P<0.01）；miR-1290类似物处理促进结肠癌细胞侵袭，而抗体中和IL-6可显著降低侵袭细胞数（P<0.01）。结论： 结肠癌细胞中miR-1290可通过抑制NDRG1形成促进NF-κB/IL-6调控轴诱导的细胞迁移和侵袭发生。
  
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  结直肠癌专题

  C14ORF169在结直肠癌中的表达及对化疗和预后的影响

  罗婷怡， 孙伟， 杨庭松， 王士林， 霍钰虎， 韦海鸿， 徐彬

  2021, 31(04): 284-289.

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  目的： 探索C14ORF169在结直肠癌组织中的表达和对化疗及预后的影响。方法： 利用Oncomine数据库分析C14ORF169在结直肠腺瘤、结直肠癌与相应正常组织中的表达水平差异。采用GEO数据库中结直肠癌样本数据集GSE12945和GSE17536分析C14ORF169表达水平与结直肠癌患者临床病理特点及预后的关系。构建C14ORF169高表达和敲减的结直肠癌细胞系，采用CCK-8法检测5-氟尿嘧啶（5-FU）半抑制浓度（IC50）。结果： C14ORF169在结直肠腺瘤和结直肠癌组织中的表达水平均高于相应的正常组织，C14ORF169高表达结直肠癌患者总生存时间和疾病特异性生存时间明显短于低表达患者（P<0.05），C14ORF169高表达与结直肠癌AJCC分期密切相关（P <0.05）。敲减C14ORF169后的结直肠癌细胞对5FU敏感性增加，反之则化疗耐药。结论： C14ORF169在结直肠癌中呈高表达，并与患者化疗耐药及预后不良相关。
  
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  结直肠癌专题

  重楼皂苷A直接靶向活化AMPK诱导结直肠癌细胞自噬

  彭鹏1,2，杨书胜1,3，向雨晨1,3，文君1,2，司渊 1,3，刘莹1,2,3

  2021, 31(04): 290-295.

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  目的： 探讨重楼皂苷A （Polyphyllin A, PPA）对结直肠癌细胞自噬的影响及其潜在机制。方法： 选用结直肠癌RKO和HRT18细胞株作为细胞模型。用不同浓度PPA处理RKO细胞和HRT18细胞，MTT法检测细胞活力，筛选最佳实验浓度；集落形成实验检测细胞克隆能力；免疫印迹法检测微管相关蛋白LC3=Ⅱ表达、腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）和雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）表达及其磷酸化；免疫荧光检测自噬体形成；分子对接分析PPA与AMPK相互间作用。结果：与0 μmol/L组相比，PPA各浓度组细胞活力明显降低（P<0.05）。与0 μmol/L组相比，PPA组两株细胞克隆形成能力明显降低（P<0.05）；随着PPA浓度逐渐增加，两株细胞中LC3-Ⅱ表达明显上调（P<0.05），自噬体发生聚集，总AMPK、mTOR蛋白无明显变化（P>0.05），而磷酸化AMPK升高、磷酸化mTOR蛋白降低（P<0.05）；PPA与AMPK存在直接结合作用。结论：PPA通过直接靶向活化AMPK诱导结直肠癌细胞发生自噬。
  
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  结直肠癌专题

  基于生物信息学的结肠癌核心基因筛选及验证

  曾成1， 祁国萍1， 沈颖1，2， 陆文斌1，2， 邓建忠1，2， 刘迁1，2， 金建华1，2

  2021, 31(04): 296-302.

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  目的:  利用生物信息学方法筛选结肠癌核心基因，并通过体外实验进行验证，挖掘潜在的结肠癌分子标志物。方法：从GEO数据库下载GSE23878、GSE37182和GSE74602数据集，应用R语言筛选结肠癌和癌旁组织的差异表达基因（differentially expressed genes， DEGs），并对DEGs进行GO富集分析、KEGG信号通路分析。利用STRING数据库构建蛋白质相互作用（proteinprotein interaction， PPI）网络，采用Cytoscape软件筛选结肠癌核心基因。利用TCGA数据库验证核心基因表达及预后价值，采用细胞转染及MTT法进一步验证核心基因的功能。结果：3个数据集筛选出270个共有DEGs，GO富集分析显示DEGs参与生长负调控、细胞外基质组织、细胞外结构组织等生物学过程，KEGG信号通路分析DEGs主要富集于Wnt、NF-κB、细胞周期等信号通路。PPI筛选出11个核心基因。经GEPIA数据库验证，MYC、TIMP1、UBE2C、SOX9、AURKA、COL1A1、CDC20、TOP2A和CENPF在结肠癌中高表达，而CAV1和CXCL12低表达。进一步生存分析显示，AURKA高表达与结肠癌患者总体生存期呈正相关（P<0.05），TIMP1高表达与结肠癌患者总体生存期呈负相关（P<0.05），COL1A1高表达与结肠癌患者无病生存期呈负相关（P<0.05）。细胞转染及MTT实验结果显示，过表达AURKA、TIMP1可显著促进结肠癌细胞增殖。结论：筛选出可能参与结肠癌发生的11个核心基因，其中AURKA和TIMP1表达变化可能与结肠癌患者预后相关。
  
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  结直肠癌专题

  自噬在结直肠癌中的作用研究进展

  柴琳琳， 袁玮， 胥传海

  2021, 31(04): 303-306，313.

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  结直肠癌是常见的消化道肿瘤之一，早期临床症状不明显，发现时往往是中晚期。自噬是一种进化保守的正常细胞中监视机制，它通过溶酶体清除分解受损的细胞器和聚集的蛋白质，并将产生的基础营养物质重新循环利用。在结直肠癌中，自噬对肿瘤的促进与抑制双重作用广泛得到认可，因此，明确自噬对结直肠癌肿瘤细胞的作用，将为结直肠癌的治疗提供更多的理论依据。本文对自噬在结直肠癌发展过程中的作用进展进行综述。
  
基础医学
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  基础医学

  NLRP3炎症小体介导单核细胞增生李斯特菌感染小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡

  袁琳， 朱昱蓉， 林琳， 黄霜， 姜旭淦， 陈盛霞

  2021, 31(04): 307-313.

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  目的:  探讨单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，Lm）感染引起小鼠和巨噬细胞的细胞焦亡作用机制。方法：体内实验，C57B/6小鼠分为Lm组和阴性对照组（NC组），分别经小鼠尾静脉注射Lm菌液5×104 CFU/鼠和无菌PBS，24 h后取脾脏、肝脏、脑组织，蛋白质印迹法检测焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotidebinding oligomerization domainlike receptor protein 3，NLRP3）炎症小体相关蛋白的表达。体外实验，分Lm组、NC组、LPS+ATP组、Lm+MCC950组和LPS+ATP+MCC950组。以感染复数（multiplicity of infection，MOI）=10 Lm感染THP-1源巨噬细胞，ELISA检测细胞上清液IL-1β，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞焦亡及NLRP3炎症小体mRNA和蛋白的表达，免疫荧光检测Lm感染后凋亡相关斑点样蛋白（apoptosisassociated specklike protein containing a CARD，ASC）斑点及与NLRP3的共定位。结果： Lm感染小鼠和巨噬细胞后，消化道皮肤素D（gasdermin D，GSDMD）蛋白表达水平均明显升高（P<0.05），且出现GSDMD蛋白氨基端裂解片段（gasdermin D N-terminal，GSDMD-NT）。Lm感染巨噬细胞1 h、3 h、6 h，NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA水平均明显升高（P<0.05），且3 h升高最明显。Lm感染小鼠的脾、肝、脑组织NLRP3、pro-caspase-1、pro-IL-1β及裂解片段caspase-1 p20、IL-1β-17蛋白表达量均明显升高（P<0.05）。Lm感染巨噬细胞后IL-1β分泌水平升高，细胞上清液中检测到裂解片段caspase-1 p20、IL1β17的分泌，细胞裂解液中NLRP3、procaspase1、proIL1β蛋白表达升高（P<0.05），荧光显微镜观察到ASC斑点形成且与NLRP3蛋白存在共定位。加入NLRP3特异性抑制剂MCC950预处理后，巨噬细胞GSDMDNT明显减少（P<0.05）。结论： Lm感染导致的细胞焦亡主要与NLRP3炎症小体的激活有关。
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  基础医学

  NFATc1对糖尿病动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠肠道菌群的影响

  刘嘉， 孙振， 侯丽娜， 钱勇江， 邵晨， 袁伟， 王中群

  2021, 31(04): 314-320.

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  目的：探究活化T细胞核因子胞浆1型（nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1, NFATc1）对糖尿病动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠肠道菌群的影响。方法：通过链脲佐菌素诱导ApoE-/-小鼠，构建糖尿病动脉粥样硬化小鼠模型，尾静脉注射腺相关病毒干扰体内NFATc1的表达。8周后处死小鼠，取其主动脉组织进行蛋白质印迹，验证NFATc1在主动脉中的敲减情况；通过HE染色分析主动脉粥样硬化斑块的相对面积。收集小鼠粪便，进行Illumina MiSeq测序，通过生物信息学分析小鼠肠道菌群纲水平的变化。结果：成功构建糖尿病动脉粥样硬化小鼠模型，尾静脉注射NFATc1敲减腺相关病毒后，其主动脉内NFATc1表达显著减少（P＜0.05）。HE染色显示主动脉有明显的粥样斑块形成，相较于阴性对照组，干扰NFATc1表达后斑块相对面积显著减小（P＜0.05）。16S rRNA基因测序结果显示，敲减NFATc1小鼠肠道内产芽胞菌纲的相对丰度（78.82%）较阴性对照组小鼠（32.93%）明显升高（W值=2）。结论：NFATc1可改变糖尿病动脉粥样硬化ApoE-/-小鼠肠道菌群的相对丰度。
  
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  基础医学

  肿瘤成纤维细胞通过外泌体miR- 21促进膀胱癌细胞侵袭转移

  魏勇1,2， 陈鹏1， 朱洪儒1， 陈全兵1， 姜亚志1， 钱文晖1

  2021, 31(04): 321-325，332.

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  （1. Department of Urology, Nanjing Gaochun People’s Hospital, Nanjing Jiangsu 211300； 2. Department of Urology, Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing Jiangsu 210029, China）

   
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  基础医学

  低氧对胰腺癌PANC-1细胞株中TWIST表达的影响

  毛正发1，罗钧艺2，李熙2，马小艳3

  2021, 31(04): 326-332.

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  目的:  探讨低氧条件对胰腺癌PANC-1细胞中TWIST表达的影响及可能的机制。方法：低氧浓度下培养PANC-1细胞，蛋白质印迹检测不同时间点TWIST蛋白的表达水平，免疫荧光检测TWIST、E-钙黏蛋白、 α-平滑肌肌动蛋白（αSMA）和波形蛋白的表达；转染TWIST siRNA后，在常氧及低氧条件下培养，蛋白质印迹检测E-钙黏蛋白, α-SMA和波形蛋白的表达。qRT-PCR及蛋白质印迹检测低氧浓度下PANC-1细胞甲基转移酶样分子3（METTL3）的表达，比色法检测细胞总的N6甲基腺嘌呤（m6A）水平；转染METTL3 siRNA后，在常氧及低氧条件下培养，比色法检测细胞总的m6A水平。在低氧条件下，转染METTL3 siRNA后，qRT-PCR及蛋白质印迹检测TWIST的mRNA和蛋白表达，MeRIP-qPCR检测TWIST mRNA m6A水平；转染METTL3野生型和突变型质粒后，蛋白质印迹检测TWIST蛋白的表达。结果：低氧处理胰腺癌细胞，TWIST表达增加，E-钙黏蛋白的表达下降, α-SMA和波形蛋白的表达升高；而同等低氧条件下敲低TWIST表达后E钙黏蛋白的表达增加，α-SMA和波形蛋白的表达下降。低氧处理后，胰腺癌细胞中METTL3的mRNA和蛋白表达均显著升高，同时细胞总的m6A水平也显著升高。常氧条件下敲低METTL3表达后胰腺癌细胞总m6A水平轻度下降，而低氧条件下敲低METTL3则显著抑制细胞总m6A水平。低氧条件下敲低胰腺癌细胞METTL3表达对TWIST mRNA表达无显著影响，但其显著降低TWIST mRNA的m6A水平，抑制TWIST蛋白表达；过表达METTL3显著上调TWIST蛋白的表达，而转入METTL3 突变质粒未见相关改变。结论：低氧诱导METTL3表达，后者通过m6A依赖的方式调控TWIST蛋白表达。
  
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  基础医学

  米贝地尔增强3，3′二吲哚甲烷对肝癌细胞的抑制作用

  姜袁越1,2，徐伟1，顾杰3，叶洋1，徐新明4，孙俊4，陈健4，陆荣柱1,5

  2021, 31(04): 333-338.

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  目的:  探讨T型钙通道阻滞剂米贝地尔对3，3′二吲哚甲烷（3，3′-diindolylmethane, DIM）抗肝癌效应的影响及其潜在的分子机制。方法： 选用肝癌SMMC-7721和HepG2细胞，分别设4组，对照组用含10%胎牛血清的高糖培养基培养24.5 h；米贝地尔组用5 μmol/L米贝地尔处理24.5 h；DIM组用60 μmol/L DIM处理24.5 h；米贝地尔+DIM组用5 μmol/L米贝地尔预处理0.5 h，再与60 μmol/L DIM共同处理24 h；采用倒置显微镜观察细胞的形态学变化；采用CCK-8法检测各组细胞增殖活力；Hoechst 33342染色观察细胞凋亡水平，蛋白免疫印迹法检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、裂解的半胱氨酸蛋白酶3（cleavedcaspase 3）以及磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylation of p38 mitogen activated protein kinase，p-p38 MAPK）表达水平；以Fluo3/AM为探针，观察肝癌细胞胞质游离钙（cytosolic free calcium，［Ca2+］i）水平。结果： 与对照组相比，DIM组细胞增殖活力下降，PCNA表达明显降低，凋亡水平升高，cleaved-caspase 3、p-p38 MAPK表达水平明显升高（P均<0.05）；部分细胞形态消失，［Ca2+］i荧光增强。与DIM组相比，米贝地尔+DIM组细胞增殖活力明显降低，PCNA表达明显下降，凋亡水平进一步升高，且cleaved-caspase 3、p-p38 MAPK表达水平进一步升高（P均<0.05）；多数细胞形态消失，［Ca2+］i荧光增强更明显。结论： T型钙通道阻滞剂米贝地尔可增强DIM抗肝癌作用，可能与［Ca2+］i水平增加以及pp38 MAPK表达升高有关。

临床医学
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  临床医学

  IL-15、IL-18、IL-21和NK细胞在梅毒血清固定患者外周血中的含量及临床意义

  程文豪， 卢雨沫， 胡文龙， 刘忠伦， 任虹

  2021, 31(04): 339-344.

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  目的： 探讨梅毒血清固定患者外周血IL-15、IL-18、IL-21和NK细胞变化及其临床意义。方法： 选取2018年10月至2020年9月徐州医科大学附属连云港医院皮肤性病科收治的梅毒血清固定患者24例为血清固定组，24例健康体检者为健康对照组。应用流式细胞仪检测两组外周血NK细胞水平，采用双抗体夹心ELISA法检测两组外周血IL-15、IL-18、IL-21。检索全网数据库，纳入有关NK细胞与梅毒血清固定相关性且符合既定标准的研究，进行Meta分析。结果： 梅毒血清固定组外周血IL-18、IL-21水平和NK细胞百分比显著低于健康对照组（P均＜0.05），两组IL15水平差异无统计学意义（P=0.173）。Meta分析显示与健康对照组相比，血清固定患者外周血NK细胞百分比明显减低［SMD=-0.64，95%CI（-1.08，-0.21），P＜0.001］。结论： 梅毒血清固定患者外周血IL-18、IL-21和NK细胞水平降低，可能与血清固定的形成相关，有望成为血清固定诊断的辅助指标。
  
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  临床医学

  氨基末端B型脑钠肽前体和降钙素原对急性心肌梗死患者预后评估的应用价值

  徐飞， 江亚， 梁建军

  2021, 31(04): 345-349.

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  目的:  探讨氨基末端B型脑钠肽前体（N-terminal B-type brain natriuretic peptide， NT-proBNP）和降钙素原（procalcitonin， PCT）对急性心肌梗死患者预后评估的应用价值。方法：本研究共纳入260例急性心肌梗死患者和248例健康对照，采用Logistic回归分析和受试者工作特征（ROC）曲线确定血清NT-proBNP和PCT水平的应用价值。结果：急性心肌梗死患者血清NTproBNP和PCT水平均高于健康对照（P<0.01）；急性心肌梗死死亡患者血清NT-proBNP、PCT水平均高于生存组（P<0.01）；两组年龄、Killip心功能分级比较，差异有统计学意义（P<0.01）；Logistic多因素分析显示年龄>60岁、Killip心功能Ⅲ~Ⅳ级、血清NT-proBNP和PCT水平均是影响急性心肌梗死患者死亡的独立危险因素（P<0.01）；ROC曲线分析显示，血清NT-proBNP和PCT水平的最佳截断点分别为228.95 ng/L，1.12 ng/mL，二者联合的灵敏度、特异度、曲线下面积（AUC）分别为79.17%，99.58%和0.861，且特异度和AUC均最高。结论：急性心肌梗死患者血清NT-proBNP和PCT水平异常升高，且均是其死亡的独立危险因素，二者联合检测对急性心肌梗死患者预后具有较好的预测价值。
  
药学
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  药学

  基于网络药理学的宣白清肺解毒汤治疗新型冠状病毒肺炎作用机制研究与初证

  巨红叶1， 2， 赵国望1， 韩立柱2， 王晓玲1， 崔翔1， 宋逍2， 唐志书2， 宋在鑫1

  2021, 31(04): 350-355.

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  目的：  基于网络药理学的方法探讨宣白清肺解毒汤治疗新型冠状病毒肺炎（COVID19）的药效作用机制。方法： 利用TCMSP数据库查询13 味中药活性化合物及对应的靶标信息，通过Uniprot数据库得到关键靶点的基因名，采用Cytoscape 3.7.2软件构建化合物疾病靶点网络图，利用GeneCards数据库检索与COVID19相关的基因，采用Venny平台筛选与COVID-19交集靶标，利用STRING数据库构建化合物靶点PPI网络图，通过DAVID数据库对靶点相关通路进行GO和KEGG富集分析，使用R软件对富集结果进行生物功能的可视化分析。结果：  宣白清肺解毒汤共筛选出活性化学成分122种，靶标638个，筛选核心靶标35个；通过GO富集分析，获得P<0.01的生物学过程共138个，包括缺乏配体的外源性凋亡信号通路、药物反应、脂多糖介导信号通路等；KEGG富集分析共得到（P<0.01）的通路有35个，共8类，其中与疾病相关的条目有结核病、乙型肝炎、美洲锥虫病等；相关的通路有癌症通路、PI3K-Akt信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等条目。分子对接结果显示所含活性化合物与COVID-19相关靶标（ACE2）的结合能均小于-5 kJ/mol，结合活性较高。结论： 该研究揭示了宣白清肺解毒汤治疗COVID19潜在的活性化学成分及可能的药效作用机制。
  
综述
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  综述

  SGLT2抑制剂治疗糖尿病心血管并发症的机制研究进展

  王亚东1， 杨延泽2,3， 魏金娜2,3， 王启隆2,3

  2021, 31(04): 356-362.

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  钠葡萄糖协同转运蛋白2（sodiumglucose cotransporter type 2, SGLT2）抑制剂是一种新型抗糖尿病药物，其降糖的主要机制是通过增加肾脏对尿糖的排泄，从而有效降低空腹血糖、餐后2 h血糖以及糖化血红蛋白，并且无低血糖风险。近期的临床研究表明，多种SGLT2抑制剂，如达格列净、卡格列净以及恩格列净等均具有良好的心血管保护作用。SGLT2抑制剂的心血管获益机制可能包括系统性地改善早期血流动力学以及直接的心肌和血管保护作用，如维持离子稳态、缓解炎症反应、抑制氧化应激、改善心肌能量代谢、提高血管内皮功能和调控血管重构等。本文对SGLT2抑制剂治疗糖尿病心血管并发症的药理学机制进行综述，以期为更好地开发和应用SGLT2抑制剂提供依据。
  
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  综述

  糖尿病大血管病变的诊断及早期治疗进展

  李安琪，刘江华

  2021, 31(04): 363-368.

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  糖尿病大血管病变是糖尿病患者的重要并发症之一，因其诊断的滞后性，糖尿病患者在确诊大血管病变时，往往已发生无法逆转的血管损伤，因而糖尿病大血管病变成为全球疾病重大负担。本文总结了近年来糖尿病大血管并发症的诊断及早期治疗进展，旨在为糖尿病大血管病变的临床诊治提供一定的思路。