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• 2019年, 29卷, 第04期
  刊出日期：2019-07-30

    

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基础医学
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  基础医学

  莫诺苷对小鼠骨髓源树突状细胞表型及功能的影响

  李慈， 张燕， 周婧文， 仇欣， 吴仪， 赵传祥，高凤威， 周文慧， 刘烁， 姚雪，

  2019, 29(04): 277-281.

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  目的:  探究莫诺苷对小鼠骨髓源树突状细胞（bonemarrow derived dendritic cells，BMDCs）分化、表型和功能的影响。方法: 体外培养C57BL/6小鼠BMDCs，分为对照组（RPMI 1640）、莫诺苷组、脂多糖组和莫诺苷+脂多糖联合处理组。用光学显微镜以及流式细胞术分别确认BMDCs形态变化和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）的荧光强度；流式细胞术检测BMDCs表面CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ类分子的表达情况以及激活抗原特异性CD4+T细胞活化、增殖和分化的能力；ELISA法检测BMDCs培养上清液中细胞因子IL6和IL12的含量。结果：  与对照组相比，莫诺苷处理后BMDCs诱导分化过程中的增殖效率无明显差异；与脂多糖组相比，莫诺苷+脂多糖联合处理后上调成熟BMDCs表面CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ类分子的表达和IL12的分泌，并促进BMDCs激活OVA323-339抗原特异性T细胞的活化、增殖以及向Th1分化。结论： 莫诺苷促进小鼠BMDCs的成熟，上调其对OVA特异性CD4+T细胞的抗原提呈功能。
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  基础医学

  小窝蛋白-1对人甲状腺上皮细胞增殖、凋亡及胞内活性氧水平的影响

  刘宝翠， 郑婷婷， 董利阳， 牟笑， 许铖铖， 毛朝明

  2019, 29(04): 282-286.

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  目的:  探讨小窝蛋白-1（Caveolin-1）对人甲状腺上皮细胞系Nthy-ori 3-1增殖、凋亡和胞内活性氧产生的影响。方法: 将正常人甲状腺上皮细胞（Nthy-ori 3-1）分为实验组和阴性对照组，分别转染 Caveolin-1敲减病毒上清液以及阴性对照病毒上清液，以未转染的Nthy-ori 3-1细胞为空白对照组，应用嘌呤霉素筛选出阳性细胞，qRT-PCR和蛋白质印迹检测3组细胞Caveolin-1的mRNA和蛋白表达；MTT 法检测Caveolin-1敲减后细胞增殖能力变化；流式细胞术检测Caveolin1敲减后细胞的凋亡率；荧光探针DCFH-DA法检测Caveolin-1敲减后细胞内活性氧水平。结果：  Caveolin1抑制性慢病毒感染后，Nthy-ori 3-1细胞Caveolin1 mRNA和蛋白水平均显著降低（P均<0.01）。抑制Caveolin-1表达后，Nthy-ori 3-1细胞增殖能力较阴性对照组明显降低，凋亡率明显增加，细胞内活性氧水平明显升高（P 均<0.01）。结论： Caveolin-1表达降低通过增加胞内活性氧水平和细胞凋亡，抑制细胞增殖，介导甲状腺上皮细胞损伤。
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  基础医学

  人参炔醇重塑巨噬细胞表型调控乳腺癌细胞生物学行为

  邵琦， 李佳丽， 周李宁， 苏兆亮， 许化溪

  2019, 29(04): 287-292.

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  目的:  探讨人参炔醇对巨噬细胞表型和功能的调控作用及对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法: 用人参炔醇处理4T1乳腺癌细胞，观察各项生物学行为变化；用4T1乳腺癌细胞培养上清液预处理RAW264.7 巨噬细胞系48 h，诱导其向M2型巨噬细胞极化；极化后的巨噬细胞再分别经不同浓度人参炔醇(0，8，16 μg/mL)处理24 h，用qRTPCR、蛋白质印迹、流式细胞术、ELISA法联合检测各组表型、抗原递呈相关分子MHCⅡ类分子、CD80、CD86表达改变、分泌谱变化，以及细胞系迁移、侵袭等。结果：  与0 μg/mL组相比，乳腺癌细胞系经8，16 μg/mL人参炔醇处理后，细胞增殖率明显降低(P均＜0.01)，细胞凋亡率明显增加(P均＜0.05)，癌细胞趋化作用减弱； M2型巨噬细胞经16 μg/mL人参炔醇刺激后，细胞表型逆转，Arg1表达明显降低(P均＜0.01)，iNOS表达明显增加(P均＜0.01)，MHCⅡ、CD80、CD86表达升高；并伴随IL1β、TNFα表达升高(P均＜0.01)，IL4、IL8、IL10表达降低(P均＜0.05)；经人参炔醇处理的巨噬细胞能够明显减少乳腺癌细胞的迁移与侵袭。结论： 人参炔醇可重塑巨噬细胞表型和功能，从而间接改变乳腺癌细胞生物学行为。
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  TACSTD2调控食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性

  武丹1， 周玲2， 糜磊1， 周月鹏1， 陈德玉1

  2019, 29(04): 293-298.

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  目的:  观察干扰肿瘤关联钙信号转导因子2(tumorassociated calcium signal transducer 2，TACSTD2)表达对食管鳞癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法: 通过组织芯片检测食管鳞癌及癌旁组织中TACSTD2表达；选用人食管鳞癌细胞ECA 109、KYSE 30及其分别对应的顺铂(cisplatin，DDP)耐药株ECA 109/DDP、KYSE 30/DDP细胞，结合TACSTD2干扰技术，通过荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测TACSTD2 mRNA和蛋白表达；CCK8实验和流式细胞术检测顺铂半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration，IC50)以及细胞凋亡变化；蛋白质印迹法分析4种细胞中TACSTD2、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein 1，MDR1)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase, MAPK)及pMAPK蛋白表达。结果：  食管鳞癌中TACSTD2表达强度高于癌旁组织(P<0.01)；食管鳞癌顺铂耐药株中TACSTD2表达水平高于对应的食管鳞癌细胞表达(P均<0.01)；干扰TACSTD2后可以显著下调4种细胞中TACSTD2表达及IC50值(P均<0.01)；结合1 μg/mL顺铂处理，TACSTD2干扰后4种细胞凋亡率明显增加(P均<0.01)；靶向下调TACSTD2后可见4种细胞中MAPK信号通路的活化抑制及MDR1表达显著降低。结论： 靶向干预TACSTD2可提高食管鳞癌的顺铂敏感性，其作用机制可能与MAPK信号活化以及MDR1表达抑制有关。
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  基础医学

  17β-雌二醇促进大鼠坐骨神经横断性损伤修复

  高建一， 张磊， 陈天琰， 唐彬， 李一镭， 李婧， 胡嘉波

  2019, 29(04): 299-304.

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  目的:  研究17β雌二醇对大鼠RSC96雪旺细胞活性的影响及对SD大鼠坐骨神经横断性损伤的修复作用。方法: 配制不同浓度的17β雌二醇溶液，用CCK8试剂盒检测雪旺细胞的增殖能力，筛选17β雌二醇作用的最适浓度；将大鼠雪旺细胞分为对照组(常规培养)和17β雌二醇组(100 nmol/L)，用蛋白印迹法检测细胞雌激素受体的表达；用Transwell实验和划痕实验检测细胞的迁移能力；用qRTPCR检测脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor，BDNF)、睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor，CNTF)、胶质细胞源性神经营养因子(glialcelllinederived neurotrophic factor，GDNF)、神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等mRNA的表达；雄性SD大鼠经腹腔注射一定浓度的17β雌二醇溶液，观察其对坐骨神经横断性损伤的修复作用。结果：  100 nmol/L 17β雌二醇溶液细胞增殖能力明显强于其他浓度(P<0.05)；与对照组相比，100 nmol/L 17β雌二醇溶液细胞增殖能力明显增强，雌激素受体表达明显增加，细胞迁移能力显著增强，BDNF、CNTF、GDNF、NGF等mRNA表达明显增加(P均<0.05)。同时，17β雌二醇促进SD大鼠坐骨神经损伤后运动和感觉功能的恢复，延缓腓肠肌的萎缩。结论： 17β雌二醇可能通过与雪旺细胞上雌激素受体结合来发挥一系列的生物学效应，促进外周神经损伤后运动和感觉功能的恢复。
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  基础医学

  miR-129通过抑制T细胞因子4的表达影响肺癌A549细胞的上皮间质转化

  金灿灿， 邵世和

  2019, 29(04): 305-309.

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  目的:  探讨miR-129对肺腺癌细胞系A549中T细胞因子4（TCF4）的表达及上皮间质转化（EMT）进程的影响及其机制。方法: 将miR-129寡核苷酸片段miR-129 mimic转染A549细胞，实时定量PCR验证转染效率。实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测转染后A549细胞TCF4、E-钙黏蛋白和波形蛋白的mRNA和蛋白表达水平。设计合成miR-129 mimic，将其与TCF4 3′-UTR报告基因质粒共转染HEK-293细胞，检测miR-129对TCF4报告基因质粒荧光素酶活性的影响，证实TCF4是miR-129的靶基因。结果：  实时定量PCR及蛋白质印迹结果均表明，上调miR-129表达后，A549细胞TCF4、波形蛋白表达明显下调（P<0.05或P<0.01），E-钙黏蛋白表达明显上调（P<0.01）。miR-129明显抑制TCF4报告基因质粒荧光素酶活性（P<0.01）。结论： miR-129通过抑制TCF4的表达阻遏A549细胞的EMT进程。
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  基础医学

  莫诺苷对小鼠T细胞体外活化与分化的影响

  吴仪， 仇欣， 张燕， 周婧文， 李慈， 赵传祥， 高凤威， 刘烁， 姚雪， 夏圣

  2019, 29(04): 310-315.

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  目的:  探讨山茱萸提取物莫诺苷对小鼠T细胞功能的影响及可能的机制。方法: 将C57BL/6小鼠脾脏制成单细胞悬液，采用抗CD3、抗CD28功能抗体模拟抗原刺激活化T细胞，分为对照组(不做任何处理)和莫诺苷组(10 μmol/L莫诺苷处理)。采用流式细胞术分析CD4+T和CD8+T细胞表面分子CD69、CD25表达水平，以及其增殖、凋亡与分化为Th1、Th2、Treg等细胞的情况；利用实时荧光定量PCR检测细胞中Tbx21、Gata3、淋巴样增强因子1(lymphoid enhance factor 1, LEF1)等mRNA水平；应用ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-4以及TGF-β含量；运用蛋白质免疫印迹技术测定细胞β连环蛋白表达量。结果：  与对照组相比，莫诺苷组中活化T细胞向Th1、Th2、Treg分化比例增加(P<0.05)，CD25活化标志增强，T细胞增殖标志Ki67有所增强，但增殖和凋亡差异均无统计学意义；IL-4和Treg细胞相关的TGF-β因子水平增加(P<0.05)，但Th1细胞分泌的IFN-γ差异无统计学意义；Tbx21、Gata3、LEF1等mRNA水平均增加(P<0.05)；蛋白质印迹显示β连环蛋白表达明显上调(P<0.01)。结论： 山茱萸提取物莫诺苷可促进小鼠T细胞分化，其机制可能与Wnt信号通路有关。
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  基础医学

  沉默热休克蛋白5可增敏青蒿琥酯诱导肝癌细胞铁死亡

  王康1， 张正阳2， 宋廉2， 龚爱华1， 王冬青2， 朱海涛2

  2019, 29(04): 316-321.

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  目的:  探讨热休克蛋白5(heat shock protein family A member 5，HSPA5)对青蒿琥酯诱导人肝癌SMMC7721细胞株化疗敏感性的影响。方法: 用不同浓度青蒿琥酯处理SMMC-7721细胞，CCK-8法检测细胞活性，筛选最佳实验浓度。将SMMC-7721细胞按以下分组处理：对照组、青蒿琥酯组、青蒿琥酯+去铁胺组，用流式细胞术检测细胞内脂质来源活性氧水平；试剂盒检测细胞内丙二醛水平。用包装HSPA5干扰或过表达质粒的慢病毒感染SMMC7721细胞，qRTPCR和蛋白质印迹法分别测定转染后HSPA5 mRNA和蛋白表达；CCK-8法检测细胞活性，试剂盒检测细胞内丙二醛水平。结果： 青蒿琥酯浓度为20 μmol/L时，SMMC-7721细胞达到半数致死量，为最佳实验浓度；流式细胞术结果显示，青蒿琥酯处理的细胞内脂质来源活性氧水平、丙二醛水平明显升高，去铁胺可抑制青蒿琥酯导致的细胞内脂质来源活性氧和丙二醛升高(均P<0.05)；经过青蒿琥酯处理的HSPA5干扰组细胞活性水平明显低于未干扰组，丙二醛水平明显高于未干扰组(均P<0.05)。结论： 干扰HSPA5可能增强人肝癌SMMC-7721细胞株对青蒿琥酯的化疗敏感性。
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  基础医学

  人神经干细胞源施万样细胞微囊泡促进大鼠神经元轴突生长

  叶开， 余佳红， 陈天琰， 高建一， 张磊， 胡嘉波

  2019, 29(04): 322-326.

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  目的:  探究人神经干细胞源施万样细胞微囊泡对大鼠神经元轴突生长的影响。方法: 选取出生4~5 d的SD大鼠乳鼠，摘取背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)，获得DRG神经元；用施万样细胞微囊泡刺激DRG神经元，行βⅢ微管蛋白免疫荧光染色，观察轴突生长情况；分别用0、5、20、40 mg/L施万细胞微囊泡刺激神经元样N2a细胞19 h，用荧光定量PCR检测N2a细胞生长相关蛋白43(growth associated protein 43, GAP43) mRNA表达；分别用0、20、40 mg/L施万细胞微囊泡刺激N2a细胞48 h，行过碘酸雪夫染色，检测细胞内糖原生成情况。结果：  施万样细胞微囊泡组的DRG神经元轴突长度明显长于PBS组(P<0.05)。施万样细胞微囊泡可被N2a细胞吞噬。与0 mg/L组相比，5 mg/L组GAP43 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)；20、40 mg/L组GAP43 mRNA表达量、突起增长率及碘酸雪夫染色细胞阳性率均明显高于0 mg/L组(P均<0.05)。结论： 施万细胞微囊泡在体外能够促进大鼠神经元轴突生长。
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  基础医学

  携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察

  施晋升1， 李峰1， 吴思慧2， 俞力超1， 刘黎琼3， 于峰4,5

  2019, 29(04): 327-332.

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  目的:  构建携带抗成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein，FAP)和抗小鼠CD3分子的双特异性抗体溶瘤痘病毒（rVVDDBiTE.FAP），并体外检测该病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株抑制作用。方法: 利用同源重组技术将PF17R启动子调控的BiTE-FAP基因和PSEL启动子调控的DsRed基因克隆入缺失痘苗生长因子(vaccinia growth factor，VGF)基因的vSC20亲本病毒TK基因处，经软琼脂空斑筛选获得VGF和TK双基因缺失的重组溶瘤痘病毒rVVDDBiTE.FAP。采用空斑计数法比较重组溶瘤病毒和亲本病毒vSC20在小鼠肺癌细胞株中的复制能力；采用MTS法检测重组溶瘤病毒rVVDDBiTE.FAP和rVVDDGFP对小鼠肺癌LLC细胞株的抑制效果，并用MTS、LDH实验进一步检测溶瘤病毒和小鼠脾脏T细胞对靶细胞的协同杀伤效果，采用ELISA法检测细胞因子IL2和IFNγ的表达。结果：  通过同源重组技术和软琼脂空斑法筛选获得rVVDD-BiTE.FAP重组溶瘤痘病毒。rVVDD-BiTE.FAP与亲本病毒具有同等复制能力；小鼠T细胞能够增强rVVDD-BiTE.FAP抗肿瘤效果。结论： rVVDD-BiTE.FAP具有高效抗肿瘤活性。
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  基础医学

  荷瘤小鼠MDSCs中TRIM25和PTEN的表达

  宋格， 赵耀， 陆薇， 王胜军

  2019, 29(04): 333-338.

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  目的:  探讨荷瘤小鼠肿瘤组织来源的髓源抑制性细胞（myeloid derived suppressor cells, MDSCs）中三基序蛋白25（tripartite motif containing 25, TRIM25）和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten, PTEN）的表达水平及其意义。方法: 构建小鼠CT26结肠癌移植瘤模型，采用实时荧光定量PCR（real time fluorescene quantitative PCR, qRTPCR）技术检测荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs和野生型小鼠脾脏来源MDSCs中TRIM25、PTEN的表达情况。结果：  在小鼠CT26结肠癌移植瘤模型中，与野生型小鼠脾脏来源的MDSCs相比，荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中TRIM25表达水平明显升高（P<0.001），PTEN表达水平显著下降（P<0.001）。结论： 荷瘤小鼠肿瘤组织来源MDSCs中TRIM25的表达升高，PTEN表达下降，提示两者或许参与调控MDSCs。
检验医学
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  检验医学

  核因子E2相关因子2在足月胎膜早破组织中的表达及临床意义

  刘佳佳1， 于骏1， 谢冰2， 方杰1， 栾晓瑾1， 颜一丹1

  2019, 29(04): 339-342.

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  目的:  探讨胎膜组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)的表达与足月胎膜早破发生发展的关系。方法: 选取30例健康孕妇(对照组)和30例胎膜早破孕妇(胎膜早破组)，采用荧光定量PCR和蛋白质印迹分别检测两组胎膜组织中Nrf2 mRNA及其蛋白的表达；免疫组织化学检测胎膜组织中Nrf2定位及表达。结果：  与对照组比较，胎膜早破组Nrf2 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.01和P<0.05)；Nrf2在胎膜组织各层结构的细胞核和细胞质中均可见，Nrf2在羊膜上皮层表达最高；与对照组比较，胎膜早破组Nrf2在羊膜上皮层、绒毛滋养细胞层和蜕膜层中表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论： 胎膜组织中Nrf2低表达可能与胎膜早破的发生发展有关。
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  检验医学

  颤抖蛋白异构体7在乳腺癌中的表达及其与患者预后的关系

  徐振雷1， 王庆伟2

  2019, 29(04): 343-346.

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  目的:  探讨乳腺癌组织中颤抖蛋白异构体7(Quaking isoform 7，QKI-7)表达及临床意义。方法: 采用免疫组织化学方法检测QKI-7、P53和Ki-67在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达和胞内定位；对肿瘤组织中QKI-7表达与患者临床病理参数、随访资料、P53及Ki-67的表达进行相关性分析。结果：  肿瘤组织中QKI-7阳性表达率明显低于癌旁组织(χ2=73.378，P<0.05)。乳腺癌组织中QKI-7表达与肿瘤直径、淋巴结转移、TNM分期及孕激素受体相关(P均<0.05)。QKI-7阴性表达患者的累计生存率明显低于QKI-7阳性患者；乳腺癌组织中QKI-7表达与P53表达呈正相关，而与Ki-67表达呈负相关(P均＜0.05)。结论： 乳腺癌组织中QKI-7呈低表达，是患者预后不良的标志。
临床医学
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  临床医学

  ¹⁸F-FDG PET/CT SUVmax与首诊原发性肺腺癌恶性程度的相关性及其对≤3 cm癌灶的风险评估

  陈香远1， 杨佩儒1， 蔡晓杰1， 张礼荣2， 朱海涛2， 王冬青2

  2019, 29(04): 347-350.

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  目的:  分析18FFDG PET/CT葡萄糖代谢活性参数最大标准化摄取值（SUVmax）与首诊原发性肺腺癌恶性程度的相关性，并分析SUVmax结合CT特征对≤3 cm的肺腺癌病灶的风险评估效能。方法: 收集经病理证实的85例首诊原发性肺腺癌患者的PET、CT图像，回顾性测量PET/CT半定量参数SUVmax。分析pT分期、病理分化程度、≤3 cm的肺腺癌病灶的病理亚型与肿瘤SUVmax的关系。结果：  85例肺腺癌患者中，pT1、pT2+pT3、pT4三组肿瘤的SUVmax中位数分别为5.15（2.58~7.29）、12.56（8.83~17.05）、18.58（16.99~19.53），差异有统计学意义（χ2=16.64，P＜0.01），且分期越晚病灶SUVmax值越高；以7.675为界值，SUVmax≤7.675时，鉴别pT1期肺腺癌的灵敏度和特异性分别为81.58%、70.59%，受试者工作特征（ROC）曲线下面积为0.767（P＜0.01）；以16.6为界值，SUVmax＞16.6时，鉴别pT4期肺腺癌的灵敏度和特异性分别为81.82%、73.68%，ROC曲线下面积为0.755（P＜0.01）。高分化、中分化、低分化三组肿瘤的SUVmax中位数分别为6.30（3.38~10.28）、7.42（5.17~11.47）、18.46（13.65~20.79），差异有统计学意义（χ2=17.38，P＜0.01），且分化程度越低病灶SUVmax越大；以9.89为界值，SUVmax≥9.89时，鉴别低分化肺腺癌的灵敏度和特异性分别为71.43%、93.75%，ROC曲线下面积为0.893（P＜0.01）。58例≤3 cm的首诊原发性肺腺癌病灶中，高风险组（浸润性腺癌）36例的SUVmax明显高于低风险组（包括原位腺癌和微浸润腺癌）22例（χ2=15.97，P＜0.01）；以5.25为界值，SUVmax＞5.25时，鉴别高风险肺腺癌的灵敏度和特异性分别为83.33%、81.82%，ROC曲线下面积为0.828（P＜0.01）。结论： 首诊原发性肺腺癌的SUVmax值与其恶性程度相关，SUVmax结合特定的CT特征可以在一定程度上提高≤3 cm的肺腺癌病灶的预后风险评估的灵敏性。
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  临床医学

  腹腔镜与开腹经腹会阴直肠切除术治疗低位直肠癌的疗效对比：基于倾向性匹配分析

  徐逸昕， 奚诚， 叶年源， 王一波

  2019, 29(04): 351-355.

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  目的:  通过对比腹腔镜与开腹经腹会阴直肠切除术(abdominoperineal resection, APR)治疗低位直肠癌的各项临床病理结果来分析两种术式的优劣。方法: 收集2012年1月至2016年1月于江苏大学附属武进医院普外科行APR的直肠癌患者临床资料。用倾向性匹配分析方法来消除接受腹腔镜手术以及开腹手术治疗患者的一般情况差异。对比分析腹腔镜组与开腹组术后血液、病理检查结果与生存情况。结果：  共有158例患者入组(腹腔镜组84例，开腹组74例)。经过排除标准筛选后剩余139例。倾向性匹配分析(1 ∶1)后每组各有49例，并且两组之间术前临床病理特征无明显差异。相比开腹组，腹腔镜组术中出血量更少，手术后血红蛋白、白蛋白含量较高，术后腹腔感染、切口感染比例更低，术后并发症严重程度更轻，恢复经口进食时间、术后住院时间更短，但住院费用较高(P均<0.05)。两组患者总生存期差异无统计学意义(P=0.754, 95%CI:0.467～2.864)。结论： 在治疗低位直肠癌患者时，两种手术方式的远期疗效相近，但腹腔镜手术的近期疗效更好。
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  临床医学

  巨细胞病毒肝损伤患儿外周血IL17、IL35与Th17/Treg的检测及其临床意义

  郁晶晶， 卜妙然， 孟令建， 叶黎离， 王军*

  2019, 29(04): 356-359.

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  目的:  探讨巨细胞病毒性肝损伤患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+ regulatory T cells, Treg）、辅助性T细胞17（Th17）、IL17及IL35水平及其临床意义。方法: 选取20例巨细胞病毒感染肝损伤患儿为肝损伤组，18例巨细胞病毒感染无肝损伤患儿为非肝损组，同期20例体检健康婴儿为对照组；采用荧光免疫PCR(FQ-PCR)法检测尿HCMV-DNA载量，流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞比例，ELISA法检测血浆IL17、IL35浓度，同时测定血清丙氨酸转移酶（ALT）含量，分析细胞比例与细胞因子之间的关联。结果：  ① 与对照组比较，肝损伤组婴儿外周血Th17细胞比例、IL17浓度明显升高，且两者呈显著正相关 (P均＜0.05)； ② 肝损伤组Treg 比例及 IL-35 浓度显著低于非肝损组和正常对照组，且Treg与IL35间呈显著正相关(P＜0.05)；肝损伤组 Th17/Treg 比值明显高于非肝损组和对照组(P均＜0.05)。③肝损伤组外周血ALT显著高于非肝损组和对照组(P均＜0.05)，非肝损组和对照组间ALT无明显差异(P>0.05)。结论： IL-17、IL-35与巨细胞病毒感染引起的肝损伤密切相关，Th17/Treg的平衡在维持巨细胞病毒感染患儿机体免疫内环境稳定中起着重要作用。
经验技术交流
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  经验技术交流

  血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1表达对非小细胞肺癌的诊断价值

  王宁新1， 陈萍1*， 李坚1， 吕梦佳1， 汪毅2

  2019, 29(04): 360-365.

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  目的:  探讨血浆lncRNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）和lncRNACCAT1表达水平对非小细胞肺癌（NSCLC）的临床诊断价值。方法: 分别收集60例NSCLC及60例良性肺病患者的血浆样本，采用实时荧光定量PCR法检测血浆中lncRNAGAS5和lncRNACCAT1的表达水平，比较两者在NSCLC组和良性肺病组的表达差异。构建受试者工作特征（ROC）曲线，根据ROC曲线图确定lncRNAGAS5和lncRNACCAT1诊断NSCLC的折点（cut off），计算两种lncRNA分别诊断及联合诊断NSCLC的敏感性、特异性、准确性、阳性预测值和阴性预测值，同时与经典肿瘤标志物癌胚抗原、细胞角蛋白19（Cyfra211）进行比较，评估这两种lncRNA诊断肺癌的效能。结果：  与良性肺病患者相比，NSCLC患者血浆中lncRNA-GAS5表达显著下调，而lncRNACCAT1表达明显上调（P均<0.05）。除血浆lncRNA-GAS5表达与吸烟相关外，血浆lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1表达与NSCLC患者的性别、年龄、组织分型、临床分期均无相关性（P均>0.05）。lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1的ROC曲线下面积（AUC）略高于癌胚抗原和Cyfra211。血浆lncRNAGAS5和lncRNACCAT1诊断NSCLC的敏感性分别为86.7%和88.3%，高于癌胚抗原和Cyfra21-1（66.7%和45.0%）。相比于单独诊断，两种lncRNA联合诊断时敏感性提升到91.7%，但特异性略有降低。当lncRNA-GAS5及lncRNA-CCAT1联合传统肿瘤标志物时诊断效能增加，且敏感性得到明显提升，特异性保持良好。结论： lncRNA-GAS5和lncRNA-CCAT1在NSCLC患者血浆中的表达水平与良性肺病患者比较有显著差异，对NSCLC的诊断有一定价值。
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  经验技术交流

  应用精子透明质酸结合试验评价精液质量的可行性

  徐杰伟， 陈美玲， 廖黎黎， 黄永汉

  2019, 29(04): 366-368.

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  目的:  探讨精子透明质酸结合试验评价精液质量的可行性。方法: 收集本院男科门诊患者549例，以精子透明质酸结合试验正常参考值(≥58.5%)为界值分为研究组275例(结合率＜58.5%)和正常对照组274例(结合率≥58.5%)，比较两组之间精液常规参数(精液体积、pH、精子浓度、前向运动百分比、活动率、正常形态率、头部缺陷率、残留胞质等) 以及精子DNA碎片率的差异；并分析精子透明质酸结合率与以上指标间的相关性。结果：  两组之间精液体积、精子DNA碎片率的差异无统计学意义(P＞0.05)，而精液pH、精子浓度、前向运动百分比、活动率、正常形态率、头部缺陷率、残留胞质等比较有显著性差异(P＜0.05)。且精子透明质酸结合率与精子浓度、前向运动百分比、活动率、正常形态率等参数呈正相关，与精液pH、头部缺陷率、残留胞质等参数呈负相关，但与精子DNA碎片率无明显相关性。结论： 精子透明质酸结合试验结果与精液常规参数具有显著相关性，在评价精液质量方面具有一定的临床应用价值。