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• 2019年, 29卷, 第03期
  刊出日期：2019-05-30

    

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  2019年第3期目录

  医学版编辑部

  2019, 29(03): 1.

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基础医学
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  基础医学

  干扰苹果酸酶3对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响

  程洁1, 陈曦2, 唐宇1, 刘菲1, 龚爱华1

  2019, 29(03): 185-188.

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  ［摘要］目的:  研究苹果酸酶3(malic enzyme 3, ME3)对人脑胶质瘤细胞线粒体分裂与融合的影响。方法: 将干扰质粒sh-ME3或对照质粒sh-EGFP转染到人脑胶质瘤LN229细胞中,用实时定量PCR、蛋白质印迹法检测干扰效率。蛋白质印迹法检测线粒体的融合与分裂指标及细胞凋亡相关蛋白；用荧光探针检测线粒体膜电位。结果：  与对照组相比，实验组ME3的 mRNA表达水平下降了76%（t= 20.16，P<0.01），蛋白表达也相应减少。转染干扰质粒sh-ME3后，线粒体分裂相关的线粒体分裂蛋白1(mitochondrial fission 1 protein，Fis-1)和动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, DRP1)表达增高，而线粒体融合相关的线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)、线粒体融合蛋白2(mitofusin 2, Mfn2)、视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy 1, OPA1)表达降低；线粒体膜电位降低；细胞凋亡相关的水解型半胱氨酸蛋白酶(cleavedcaspase-3)表达增加，而B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）表达降低。结论： 干扰ME3促进了胶质瘤细胞线粒体的分裂，抑制了其融合，降低了膜电位，从而引起细胞凋亡。
   
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  基础医学

  人胚胎干细胞源神经球条件培养液对大鼠施万细胞增殖和迁移的影响

  纪贤严, 高建一, 叶开, 张磊, 曹江素, 胡嘉波

  2019, 29(03): 189-194.

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  目的:  探讨人胚胎干细胞源神经球条件培养液(human embryonic stem cell-derived neurospheres conditioned medium, hESCN-CM)对施万细胞增殖和迁移的影响及其潜在的机制。方法: 取3~5 d SD大鼠双侧坐骨神经，分离纯化施万细胞，用免疫荧光染色法进行鉴定。分别用0%、50%和100% hESCN-CM刺激施万细胞，CCK8实验检测细胞增殖，划痕实验检测细胞迁移，实时荧光定量PCR检测Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf、Igf-1等mRNA的表达。结果：  免疫荧光染色结果显示，施万细胞S100特异性表达可达99%。CCK-8实验显示，与0% hESCN-CM相比，50% hESCN-CM刺激后施万细胞增殖明显增强，100% hESCN-CM刺激后施万细胞增殖明显降低(P均<0.05)。划痕实验显示，刺激6 h，与0% hESCN-CM刺激后施万细胞相比，50%和100% hESCN-CM刺激后施万细胞迁移明显增强(P<0.05)；刺激12 h，50% hESCN-CM刺激后施万细胞迁移明显增强(P<0.01)，100% hESCN-CM差异无统计学意义。荧光定量PCR结果显示， 与0%hESCN-CM相比，50%hESCN-CM刺激后施万细胞Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf等mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论： hESCN-CM可能通过上调Nt3、Vegf、Ngf、Bfgf等mRNA表达促进施万细胞增殖和迁移。
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  基础医学

  重组胰高血糖素样肽-1载体的构建及其在枯草芽孢杆菌中的表达

  袁婧1, 郭畅1, 李昊翔1, 徐梦娇1, 丁艺1, 赵丽1

  2019, 29(03): 195-200.

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  目的:  构建及鉴定携带His标签的重组胰高血糖素样肽-1（modified glucagon-like peptide-1，mGLP-1）表达载体，实现其在枯草芽孢杆菌WB800N中的分泌表达。方法: 经化学合成得到含有His标签及BamHⅠ/XbaⅠ酶切位点的mGLP-1基因片段，将其酶切后插入含信号肽amyQ序列的大肠埃希菌枯草芽孢杆菌双穿梭载体pHT43中，得到重组载体pHT43-mGLP-1；通过电转化方法将质粒pHT43-mGLP-1转化到枯草芽孢杆菌 WB800N中，构建含有目的基因的重组菌株WB800N/pHT43-mGLP-1，利用聚合酶链式反应（PCR）、碱基测序、甘氨酸聚丙烯酰胺凝胶电泳（Tricine-SDS-PAGE）及蛋白质印迹法鉴定重组的枯草芽孢杆菌。结果：  菌落PCR和测序结果表明，阳性克隆质粒pHT43-mGLP-1成功转化进枯草芽孢杆菌WB800N；Tricine-SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测表明，重组菌株WB800N/mGLP-1培养上清液中有mGLP-1蛋白表达，且1 mmol/L IPTG诱导下蛋白表达量明显增加。结论： 成功构建了携带mGLP-1基因的表达载体并实现了其蛋白在枯草芽孢杆菌中的分泌表达, 为后续动物实验和制备微生态活菌制剂奠定了基础。
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  基础医学

  髓相关蛋白14过表达对人甲状腺上皮细胞增殖的影响

  董昕, 董利阳, 罗旋, 毛朝明

  2019, 29(03): 201-204.

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  目的:  探讨髓相关蛋白14（myeloidrelated protein 14，MRP14）过表达对人甲状腺上皮细胞增殖及分泌甲状腺激素的影响。方法: 免疫组织化学染色方法检测 MRP14蛋白在单纯性甲状腺肿和桥本甲状腺炎（HT）患者甲状腺组织中的表达；将MRP14基因过表达质粒pcDNA3.1MRP14或对照质粒pcDNA3.1瞬时转染入人甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori 3-1，构建MRP14过表达甲状腺滤泡上皮细胞系；转染48 h后收集细胞及培养上清液，实时定量PCR检测 MRP14的转染效果；MTT法检测细胞增殖，化学发光免疫法检测细胞培养上清液中游离甲状腺素（FT4）浓度。结果：  与单纯性甲状腺肿患者相比，桥本甲状腺炎患者甲状腺组织中MRP14蛋白表达明显增多；MRP14基因转染成功后，MRP14过表达组Nthy-ori 3-1细胞存活率较对照组明显降低（P＜0.01），培养上清液中 FT4浓度较对照组明显降低（P＜0.01）。结论： 成功构建MRP14过表达甲状腺滤泡上皮细胞系；MRP14蛋白可能通过抑制甲状腺细胞增殖和甲状腺激素的分泌参与桥本甲状腺炎的发生发展。
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  基础医学

  香烟烟雾促进膀胱癌干细胞的自我更新和干性基因的表达

  梁照锋, 陶海, 郭文浩, 吴娱, 朱妍, 刘静, 钱晖, 许文荣

  2019, 29(03): 205-207.

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  目的:  探讨香烟烟雾对膀胱癌干细胞自我更新能力和干性基因表达的影响。方法: 用不同浓度（0%、0.1%和0.25%）的香烟烟雾悬液处理人膀胱癌细胞UM-UC-3来源的膀胱癌干细胞4 d，显微镜下观察膀胱癌干细胞球大小及数量，蛋白质印迹检测干性基因CD44、ALDH1-A1、OCT-4、Nanog等的蛋白表达。结果：  0.1%和0.25%的香烟烟雾悬液能够促进膀胱癌干细胞细胞球的形成，香烟烟雾处理组的细胞球明显大于对照组；蛋白质印迹结果显示，0.1%和0.25%的香烟烟雾悬液处理的膀胱癌干细胞CD44、ALDH1-A1、OCT-4、Nanog表达显著增加。结论： 香烟烟雾能够促进膀胱癌干细胞的自我更新和干性基因的表达。
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  基础医学

  miR-381靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

  王晖, 徐雪莹, 张徐

  2019, 29(03): 208-215.

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  目的:  探讨微小RNA-381(miR-381)对前列腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并研究miR-381的靶基因及其功能。方法: 采用qRT-PCR检测miR-381在人前列腺癌细胞系中的表达水平。采用基因转染方法过表达或敲减miR-381在前列腺癌细胞中的表达,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕损伤实验、Transwell迁移实验和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用生物信息学方法预测miR-381靶点,并采用荧光素酶报告基因分析进行验证。结果：  miR-381在前列腺癌细胞中低表达。与空白对照组相比,miR-381 mimics组前列腺癌细胞增殖能力明显降低,克隆数显著减少,凋亡明显增加,迁移和侵袭的细胞数减少;miR-381 inhibitor组结果则相反。荧光素酶报告基因分析证实MAP3K2是miR-381中的靶基因。miR-381 mimics下调而miR-381 inhibitor上调前列腺癌细胞中MAP3K2 基因和蛋白表达。 结论： miR-381通过靶向MAP3K2抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,发挥抑癌基因作用。
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  基础医学

  黑色素转铁蛋白重组慢病毒载体的构建及其在宫颈癌HeLa细胞中的功能验证

  杨悦， 李婉， 卢春

  2019, 29(03): 216-220.

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  目的:  构建黑色素转铁蛋白(melanotransferrin，MFI2)基因嵌入的慢病毒载体，上调宫颈癌HeLa细胞中MFI2表达水平，并探讨MFI2对HeLa细胞增殖的影响。方法: 以HeLa细胞cDNA为模板复制扩增MFI2相应片段，并将该单边对应序列嵌入到慢病毒载体pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen(pHAGE)质粒中构建pHAGE-MFI2重组质粒；将重组质粒与包膜质粒pMD2.G、包装质粒psPAX2协同转染入人胚肾上皮293T细胞，制备MFI2融合病毒，通过梯度稀释法检测病毒滴度。以MFI2融合病毒感染HeLa细胞，通过免疫印迹法检测MFI2标签在细胞中的表达量，采用CCK-8法及划痕实验评价上调MFI2表达量对HeLa细胞扩增能力的影响。结果：  质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果均证实pHAGE-MFI2质粒构建成功；通过慢病毒三质粒协同包装系统成功构建MFI2基因融合慢病毒，病毒液滴度高达6×10⁷ TU/mL；MFI2慢病毒感染HeLa细胞后，其MFI2的蛋白表达水平明显增高，而细胞增殖活力则显著降低。结论： MFI2高表达可有效抑制HeLa细胞增殖。
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  基础医学

  人参炔醇联合吉西他滨对胰腺癌干细胞分化及活性的影响

  杨佩儒1, 宋廉2, 张礼荣2, 朱海涛2, 王冬青2

  2019, 29(03): 221-225.

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  目的:  探讨人参炔醇和吉西他滨联合作用对胰腺癌干细胞(pancreatic cancer stem cell, PCSC)干性及活性的影响。方法: 体外悬浮培养法培养和富集人胰腺癌PANC-1细胞系干细胞，采用荧光激活细胞分选法（fluorescence activated cell sorting，FACS）分选出CD133⁺的细胞亚群；将分选的CD133+细胞分为PBS（对照）组、人参炔醇组、吉西他滨组和人参炔醇与吉西他滨联合组，人参炔醇与吉西他滨最终浓度分别为164 μmol/L，2 μmol/L。流式细胞术检测各组细胞CD133+比例；CCK-8实验检测细胞增殖率；Annexin-V/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测增殖相关蛋白Ki-67及凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果：  各组细胞处理48 h后,与对照组相比，人参炔醇组、吉西他滨组和联合组CD133⁺细胞比例明显减少, 而两药联合作用CD133⁺细胞比例减少更显著(P<0.01)；人参炔醇和吉西他滨均可抑制胰腺癌PANC-1干细胞增殖并促进细胞凋亡(P<0.05),而联合作用对干细胞增殖能力的抑制作用更显著(P<0.01)，促进细胞凋亡更明显(P<0.01)；与人参炔醇组和吉西他滨组相比，联合组的Ki-67和Bcl-2表达明显下降。结论： 人参炔醇联合吉西他滨可促进胰腺癌干细胞体外分化，并抑制细胞增殖,促进细胞凋亡，从而抑制细胞活性。
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  基础医学

  T细胞死亡相关基因8对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

  罗红1, 邵东华1, 胡秀兰2, 马晓冬1

  2019, 29(03): 226-231.

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  目的:  探讨活化T细胞死亡相关基因8（T cell death associated gene 8，TDAG8）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。方法: 将健康成年雄性SD大鼠132只采用随机数字表法分为6组：对照组（n=18），缺血再灌注组（I/R组，n=42），TDAG8激动剂BTB09089组（BTB组，n=18），空白载体组（空载体组，n=18），TDAG8-siRNA阴性对照组（siRNA阴性组，n=18）和TDAG8-siRNA组（siRNA组，n=18）。采用线栓法短暂性阻塞大鼠大脑中动脉（middle cerebral artery occlusion，MCAO）制备大鼠局灶性脑I/R模型。BTB组、空载体组、siRNA阴性组和siRNA组于缺血前72 h、48 h 和24 h分别经侧脑室注射20 μmol/L的BTB09089、空白转染试剂jetPEI、4 μg siRNA阴性对照和4 μg TDAG8-siRNA各8 μL，其中空载体组、siRNA阴性组和siRNA组同时均注入等量转染试剂jetPEI。于再灌注6 h时每组取6只大鼠断头取脑，蛋白质印迹法检测缺血半暗带TDAG8、cleaved caspase-3、Bcl-2和TDAG8下游相关蛋白p-Akt、p-CREB的表达水平；于再灌注24 h和72 h时每组分别取6只大鼠评价神经功能并测定脑梗死体积百分比。结果：  与对照组比较，其他5组再灌注6 h时缺血半暗带TDAG8、cleaved caspase-3、p-Akt和p-CREB表达均上调（均P<0.05），Bcl-2表达下调（P<0.05），再灌注24 h和72 h时脑梗死体积百分比明显升高、神经功能缺陷评分显著降低（均P<0.05）；与I/R组比较，BTB组再灌注6 h时 TDAG8、Bcl-2、p-Akt和p-CREB水平上调（均P<0.05），cleaved caspase-3表达下调（P<0.05），再灌注24 h和72 h时脑梗死体积百分比显著降低，神经功能缺陷评分明显升高（均P<0.05）；与siRNA阴性组比较，siRNA组再灌注6 h时TDAG8、Bcl-2、p-Akt和p-CREB水平下调（P<0.05），cleaved caspase-3表达上调（P<0.05），再灌注后24 h和72 h脑梗死体积百分比显著升高，而神经功能缺陷评分明显降低（P<0.05）。结论： 活化TDAG8可能通过Akt信号通路调控短暂性大鼠MCAO诱导的脑缺血再灌注损伤。
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  基础医学

  曲前列环素通过下调Erk磷酸化水平抑制血小板衍生生长因子诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖

  王骞1, 吕季阳2, 王艳1, 史卫群1, 吕进泉1

  2019, 29(03): 232-237.

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  目的:  探讨曲前列环素(Trep)对血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PAMSCs)增殖的影响及其潜在的机制。方法: 体外培养大鼠PASMCs，实验分2阶段进行。第1阶段将细胞分为4组：对照组、PD98059(Erk磷酸化抑制剂)组、PDGF组和PDGF+ PD98059组；第2阶段也分为4组：对照组、Trep组、PDGF组和PDGF+Trep组。PD98059组用50 μmol·L-1 PD98059处理，Trep组用5 μmol·L-1 Trep处理，PDGF组均用20 μg·L-1 PDGF处理， PDGF+PD98059组用50 μmol·L-1 PD98059+20 μg·L-1 PDGF共处理，PDGF+Trep组用5 μmol·L-1 Trep和20 μg·L-1 PDGF共处理。24 h后光镜下观察细胞形态；MTT法测定PAMSCs增殖活性；蛋白质印迹法测定各组细胞内增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)、p-Erk1/2及t-Erk1/2蛋白的相对表达量，并计算p-Erk/t-Erk比值。结果：  第1阶段：PDGF组细胞密度、细胞增殖活性、PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值均明显高于对照组(P均<0.05)；PDGF+ PD98059组细胞增殖活性、PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值明显低于PDGF组(P均<0.05)。第2阶段：PDGF组细胞密度、细胞增殖活性、细胞内PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值明显高于高于对照组；PDGF+Trep组细胞密度、细胞增殖活性、PCNA表达量及p-Erk/t-Erk比值明显低于PDGF组(P<0.05)。结论： 曲前列环素通过可抑制血小板衍生生长因子诱导的大鼠PASMCs增殖，与下调Erk1/2磷酸化水平有关。
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  基础医学

  丝素蛋白壳聚糖三维支架的构建及其生物相容性

  牛涵波1, 陈枉枉1, 徐义英1, 孙茂民1, 王守立2

  2019, 29(03): 238-241.

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  目的:  筛选出最适合用于骨组织工程的丝素蛋白壳聚糖三维支架比例。方法: 将提取的丝素蛋白溶液与壳聚糖溶液以不同质量比混合，冷冻干燥后构建以下各组丝素蛋白壳聚糖三维多孔支架：20%丝素蛋白 ∶80%壳聚糖（20%丝素蛋白组）、30%丝素蛋白 ∶70%壳聚糖（30%丝素蛋白组）、40%丝素蛋白 ∶60%壳聚糖（40%丝素蛋白组）、50%丝素蛋白 ∶50%壳聚糖（50%丝素蛋白组）、纯丝素蛋白组、纯壳聚糖组。采用扫描电镜观察各组三维支架表面形态；将MG-63细胞与丝素蛋白/壳聚糖三维支架共培养（对照组采用盖玻片培养MG-63细胞），通过细胞计数计算细胞黏附率，通过MTT检测细胞增殖；通过扫描电镜观察MG-63细胞在40%丝素蛋白、50%丝素蛋白三维支架中的形态分布；采用pNPP显色液检测40%丝素蛋白、50%丝素蛋白三维支架中MG-63细胞碱性磷酸酶（ALP）含量。结果：  不同比例丝素蛋白/壳聚糖三维支架中，50%丝素蛋白、40%丝素蛋白支架表面孔隙结构相对规则；黏附率结果显示，三维支架中丝素蛋白含量最少时，支架的细胞黏附率也最低；MTT显示50%丝素蛋白组细胞增殖能力强于其他组支架；MG-63细胞与支架共培养时，50%丝素蛋白支架中细胞量多于40%丝素蛋白组；在共培养第5天，50%丝素蛋白组细胞分泌的ALP含量高于40%丝素蛋白组。结论： 质量比为1 ∶1的丝素蛋白壳聚糖支架孔隙结构规则，最适合成骨细胞MG-63的黏附、增殖。
检验医学
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  检验医学

  人降钙素原的原核表达及其单克隆抗体的制备

  刘卿, 汪慧, 卢叶, 吴亮, 陈盛霞, 姜旭淦

  2019, 29(03): 242-247.

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  目的:  原核表达人降钙素原（procalcitonin，PCT）重组蛋白，制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法: 将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白，经Ni-NTA亲和层析法纯化，用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）融合，筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次。将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体，经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化。结果：  SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量约14 kDa处有一明显条带，与目的蛋白大小相符。蛋白质印迹法和胶体金法证明该可溶性蛋白为PCT。采用细胞融合技术成功筛选出7株阳性杂交瘤细胞，将其命名为B3，C4，C7，E9，F8，F10，G2。选B3和C4细胞株通过体内诱生法制备单克隆抗体，经纯化后纯度可达95%以上。间接ELISA法检测B3、C4抗体效价均可达10⁷，亲和常数分别为5.06×10⁸，7.3×10⁸。结论： 获得高纯度的PCT重组蛋白及其单克隆抗体，为PCT检测试剂盒的进一步研究提供了支持。
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  检验医学

  VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控

  唐浩, 仇越, 袁睿韬, 黄新祥, 张义全

  2019, 29(03): 248-252.

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  目的:  构建vpa0961基因突变株及其回补株，并初步探究VPA0961对副溶血弧菌运动能力的调控作用。方法: 以副溶血弧菌RIMD2210633野生株的基因组DNA为模板，PCR扩增得到vpa0961的同源臂融合片段，并克隆至自杀质粒pDS132多克隆位点。将pDS132重组质粒通过结合转移的方式转入野生株，进而通过同源重组方法替换原始vpa0961，制备vpa0961无痕突变株(Δvpa0961)。PCR扩增vpa0961整个编码区序列，并将其直接克隆入pBAD33质粒，获得重组回补质粒。将回补质粒结合转移到Δvpa0961中，然后通过特异性引物PCR鉴定并外送测序以获得回补株。将副溶血弧菌的预培养物接种于游动(swimming)和爬动(swarming)平板，37℃静置培养，比较不同菌株间菌苔直径的差异。采用qRT-PCR分析鞭毛蛋白基因lafA、flaB和flaF的mRNA表达水平。结果：  特异性扩增及序列分析显示,成功构建vpa0961基因突变株和回补株；与野生株相比，Δvpa0961游动能力和爬动能力明显减弱(t=14.06，36.37，P<0.05)；与野生株相比，Δvpa0961 lafA、flaB和flaF mRNA转录水平明显降低(t=185.2，56.36，50.24，P<0.05)。结论： 成功构建vpa0961的基因突变株和回补株，且VPA0961对鞭毛基因的转录具有正调控作用。
临床医学
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  临床医学

  微阵列芯片分析miR-125b-5p在胃癌中的表达及临床意义

  张烜烽1, 2, 陈正威1, 2, 章安伟1, 2, 步雪峰2

  2019, 29(03): 253-257.

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  目的:  运用生物信息学技术分析胃癌中microRNA表达特征。方法: 使用R语言软件包分析GEO芯片数据集的两个子集中的miRNA表达量的差异；采用qRT-PCR技术检测本院60例胃癌患者癌组织及20例胃癌手术患者癌旁组织中miR-125b-5p的表达量，统计分析其表达特征与分化程度、TNM分期、性别、年龄、家族史及肿瘤直径之间的关系。结果：  miR-125b-5p在GSE93415和GSE99415中的表达均上调，且其在胃癌组织与癌旁胃组织表达量差异具有统计学意义（P<0.05）。使用qRT-PCR验证了miR-125b-5p在胃癌组织中的表达高于癌旁组织的趋势，miR-125b-5p表达量与TNM分期和浸润程度有关（P<0.05），与年龄、性别、家族史、肿瘤直径和分化程度均无关（P>0.05）；高表达miR-125b-5p的胃癌患者生存期明显缩短。结论： 胃癌组织miR-125b-5p高表达，且与胃癌TNM分期、浸润程度及总生存率有关。
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  临床医学

  前列腺癌相关基因及功能的生物信息学分析

  何宜宸1, 孙浩2, 焦志敏1, 周洋1, 王诚悦1, 张金虎1, 陈兵海2

  2019, 29(03): 258-263.

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  目的:  利用生物信息学方法和体外实验,寻找前列腺癌发生的关键基因。方法: 从GEO 数据库下载基因芯片数据 GSE60502,其中包括48例正常前列腺组织样本和47例前列腺癌组织样本。利用Morpheus(https:∥software.broadinstitute.org／morpheus／)在线工具分析前列腺癌组织和正常前列腺组织的差异表达基因,然后使用GCBI(https:∥www.GCBI.com.cn)在线进行差异表达基因的基因本体富集论(gene ontology,GO)分析、Pathway分析,对同时参与GO分析和Pathway分析的差异基因取交集,构建基因共表达网络和基因相互作用网络。最后通过CCK8实验进行验证。结果：  共筛选出6 903个表达差异的基因,差异最大的前15个基因中,有上调基因9个,下调基因6个,其中表达差异最大的基因为CRISP3。GO分析提示差异基因主要参与的分子生物学过程包括小分子代谢过程、信号转导、DNA依赖的转录过程、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调节等。Pathway分析提示差异基因主要参与的通路包括PI3K-Akt信号通路、代谢途径、MAPK信号通路以及Wnt信号通路等。CACNA1A基因位于共表达网络的核心位置,而ADCY5、PIK3CB基因位于基因相互作用网络的核心位置。 体外CCK8实验证实下调CACNA1A表达可明显抑制前列腺癌细胞增殖能力。 结论： CRISP3、CACNA1A、ADCY5、PIK3CB基因可能是影响前列腺癌发生的关键基因。
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  临床医学

  外周血中DPD mRNA和TS mRNA表达对含卡培他滨方案治疗进展期胃癌的疗效预测

  李先敏, 练炼, 慎晓明

  2019, 29(03): 264-268.

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  目的:  探讨进展期胃癌(advanced gastric carcinoma, AGC)患者外周血中二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase，DPD)和胸苷酸合成酶(thymidylate synthase，TS)的表达，及其与含卡培他滨的方案疗效的关系。方法: 选择经影像学及病理学诊断为AGC患者60例，化疗前抽取外周血，使用反转录PCR法检测患者外周血中DPD mRNA和TS mRNA的表达水平；给予含卡培他滨片(首辅)的方案化疗：卡培他滨片(1 000 mg·m^-2·d^-1，分2次口服，d1~d14)+奥沙利铂 130 mg·m^-2，静脉滴注2 h，d1，21 d为1个周期；分析DPD mRNA和TS mRNA表达水平与患者临床病理特征及化疗疗效的关系。结果：  60例AGC患者DPD mRNA和TS mRNA的相对表达量分别为 2.702±1.993和0.717±0.360。AGC患者外周血中DPD mRNA及TS mRNA表达与患者Lauren分型明显相关(DPD： χ ²=4.571，P=0.033；TS： χ² =8.124，P=0.004)。TS mRNA表达量亦与是否有远处转移明显相关(χ ²=7.716，P=0.007)。DPD mRNA及TS mRNA表达越高，患者接受含卡培他滨方案的疗效越差(DPD：r=-0.565，P<0.01；TS：r=-0.571，P<0.01)。DPD mRNA及TS mRNA联合高表达组接受含卡培他滨方案的疗效最差(P<0.05)。结论： AGC患者外周血清中DPD mRNA及TS mRNA呈高表达，与其部分恶性临床特征及含卡培他滨方案疗效不良相关。
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  良恶性胸腔积液中lncRNA MEG3和HOTAIR的表达及其鉴别诊断

  徐亚萍1, 李坚1, 吕梦佳1, 汪毅2

  2019, 29(03): 269-272.

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  目的:  探讨良恶性胸腔积液中长链非编码RNA (long non-coding RNA，lncRNA) HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA，HOTAIR)和母系表达基因3 (materally expressed gene 3，MEG3)的表达及其临床意义。方法: 留取51例恶性胸腔积液患者及50例良性胸腔积液患者的胸腔积液标本，采用实时荧光定量PCR测定HOTAIR和MEG3相对表达水平。通过构建受试者工作特征(ROC)曲线评价这两个lncRNAs甄别良恶性胸腔积液的效能，并与癌胚抗原测定结果比较。结果：  恶性胸腔积液中HOTAIR表达水平明显高于良性胸腔积液(t=3.928，P<0.05)，MEG3表达水平明显低于良性胸腔积液( t=5.515，P<0.05)。HOTAIR和MEG3诊断恶性胸液的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.863(95%CI：0.780~0.946)和0.853(95%CI：0.766~0.940)，与癌胚抗原AUC(0.850，95%CI：0.764~ 0.936)相近。HOTAIR和MEG3诊断恶性胸腔积液的敏感性分别为85.8%和87.9%，特异性分别为84.1%和88.1%，略高于癌胚抗原的敏感性(74.0%)和特异性(80.2%)。联合检测胸腔积液中HOTAIR、MEG3和癌胚抗原可进一步提高诊断恶性胸腔积液的敏感性(90.0%)和特异性(93.1%)。结论： 良恶性胸腔积液中HOTAIR和MEG3表达有差异，两者检测对胸腔积液的鉴别诊断有一定临床价值。
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  妊娠糖尿病患者血清脂肪酸结合蛋白4浓度与妊娠高血压综合征及先兆子痫的关系

  顾文文, 李国民, 丁屹, 袁霞

  2019, 29(03): 273-276.

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  目的:  探讨妊娠糖尿病患者血清脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein 4, FABP4)浓度与妊娠高血压综合征（简称妊高征）及先兆子痫的关系。方法: 选取613例妊娠糖尿病患者作为研究对象。39例妊娠糖尿病并发妊高征及先兆子痫患者作为观察组,按1 ∶2比例选择78例孕周相近且未并发妊高征及先兆子痫的妊娠糖尿病作为对照组。采用单因素及Logistic回归分析两组临床资料,探究影响妊娠糖尿病患者并发妊高征及先兆子痫的危险因素。比较不同预测妊娠糖尿病并发妊高征及先兆子痫模型的诊断效能。结果：  613例妊娠糖尿病患者中,39例(6.36％)并发妊高征或先兆子痫,其中18例(2.94％)并发先兆子痫。观察组FABP4、中期BMI、HOMA-IR、三酰甘油及LDL水平明显高于对照组(P均<0.05),而HDL明显低于对照组(P<0.05)。FABP4>14.72 ng／mL、孕中期BMI>28.42 kg／m ²、三酰甘油>2.91 mmol／L、HDL≤1.78 mmol／L及LDL>3.08 mmol／L是妊娠糖尿病并发妊高征或先兆子痫的危险因素。妊娠糖尿病并发妊高征或先兆子痫患者血清FABP4水平与孕前BMI、孕中期BMI均呈一定的正相关;与年龄、HbAlc、HOMA-IR、总胆固醇、三酰甘油、HDL及LDL均无明显相关性。模型B预测妊娠糖尿病并发妊高征及先兆子痫的ROC曲线下面积大于模型A( Z=1.080,P=0.280)和FABP4( Z=3.801,P<0.05)。模型A预测妊娠糖尿病并发妊高征及先兆子痫的ROC曲线下面积大于FABP4(Z=2.574,P=0.010)。 结论： 检测妊娠糖尿病患者血清FABP4浓度有助于评估其并发妊高征及先兆子痫的风险。