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| 小鼠CCL20 mRNA 实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 陈艳红, 朱晨露, 魏衍财, 秦伟, 田洁, 袁靖, 陈娟, 吴晶晶, 汤新逸, 许化溪, 王胜军 |
| （江苏大学检验医学研究所, 江苏 镇江 212013） |
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| Establishment of the realtime fluorescence quantitative PCR assay for detection of murine adipose tissue chemokine CCL20 mRNA expression |
| (Institute of Laboratory Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang Jiangsu 212013,China) |
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摘要 目的： 建立检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20（CC chemokine ligand 20）mRNA的实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR, qRTPCR）的方法。方法： 分离小鼠脂肪组织细胞,经PMA和离子霉素刺激4 h后收集细胞提取总RNA并逆转录为cDNA。采用qRTPCR方法检测趋化因子CCL20 mRNA的表达水平。评价该方法的特异性,同时应用该方法检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20mRNA相对表达水平。结果： 建立了小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的SYBR Green 实时荧光定量PCR检测方法,结果显示该方法的熔解曲线为单峰,同时核酸电泳显示一条特异性条带。检测结果表明高脂饮食诱导的肥胖小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20的相对表达水平明显高于正常饮食对照组(t=3.02,P＜0.05)。结论： 建立了检测小鼠脂肪组织中趋化因子CCL20 mRNA的实时荧光定量PCR方法,特异性好、灵敏性强,为进一步研究小鼠CCL20的生物学功能提供了实验基础。
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| 关键词 ：
趋化因子CCL20,
SYBR Green Supermix,
实时荧光定量PCR
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| 基金资助: 国家自然科学基金资助项目（30972748,30871193,30910103087）； 江苏省科技厅自然科学基金资助项目（BK2011472）； 江苏省卫生厅医学科研基金（200952）； 江苏省“青蓝工程”项目（苏教师〔2010〕27号）； 江苏大学“拔尖人才工程”和高级人才基金项目（2008-018-02） |
| 引用本文: |
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陈艳红, 朱晨露, 魏衍财, 秦伟, 田洁, 袁靖, 陈娟, 吴晶晶, 汤新逸, 许化溪, 王胜军. 小鼠CCL20 mRNA 实时荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 江苏大学学报:医学版, 2012, 22(4): 299-301.
CHEN Yan-Hong, ZHU Chen-Lu, WEI Yan-Cai, QIN Wei, TIAN Jie, YUAN Jing, CHEN Juan, WU Jing-Jing, TANG Xin-Yi, XU Hua-Xi, WANG Sheng-Jun. Establishment of the realtime fluorescence quantitative PCR assay for detection of murine adipose tissue chemokine CCL20 mRNA expression. Journal of Jiangsu University(Medicine Edition), 2012, 22(4): 299-301.
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| 链接本文: |
| http://zzs.ujs.edu.cn/xbyxb/CN/ 或 http://zzs.ujs.edu.cn/xbyxb/CN/Y2012/V22/I4/299 |
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2012, Vol. 22 
