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| 人胰岛因子1基因启动子的克隆及活性鉴定 |
| 路康， 金蕊， 周国平 |
| (南京医科大学第一附属医院儿科， 江苏 南京 210029) |
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摘要 目的: 克隆含人胰岛因子1(islet1，ISL1)基因上游启动子序列的质粒并检测其在人胚肾HEK-293细胞中的启动子活性。方法: 以HEK-293细胞提取的DNA为模板，PCR扩增ISL1基因启动子区全长1 419 bp片段；酶切后将此片段连接至pGL3-Basic载体，克隆含有ISL1基因启动子片段的重组质粒；以此重组质粒为模板重复上述步骤构建一系列ISL1启动子5′侧翼区截短质粒。将含ISL1启动子序列的重组质粒及其截短质粒转染至人胚肾HEK-293细胞，双荧光素酶报告基因检测各片段的启动子活性，找出启动子最小活性区域，并通过生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果： 经酶切、测序鉴定，成功构建含有ISL1启动子序列的重组质粒及其截短质粒。与pGL3-Basic空载体相比，含有ISL1启动子序列的重组质粒启动子活性明显增加(P<0.01)。ISL1最小活性区域位于转录起始位点-173 bp至-1 bp之间，其中包含OCT-1、MYOD、E2F2等多个转录因子结合位点。结论： 人ISL1转录起始点上游1 215 bp区域在HEK-293细胞中具有较强启动子活性。
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| 关键词 ：
启动子活性,
胰岛因子1,
人胚肾细胞
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收稿日期: 2017-06-17
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2017, Vol. 27 
